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旨在对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)Nsp5基因进行原核表达,利用生物信息学软件,预测其编码蛋白的结构和功能,为了解PEDV致病机理奠定基础。本研究克隆PEDV/LY/2014/04毒株的Nsp5基因,亚克隆进pET-28a(+)原核表达载体,PCR和酶切验证重组质粒的构建,重组质粒pET-28a(+)-Nsp5转入E.coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE检测Nsp5的表达和His band Ni+纯化情况,Vector NTI Advance等软件对Nsp5蛋白氨基酸组成、抗原表位、二级和三级结构进行预测和分析。结果表明,成功克隆并构建了重组质粒pET-28a(+)-Nsp5,表达重组蛋白大小约22 ku,且主要以包涵体形式存在,His band Ni+纯化后获得高纯度重组蛋白。Nsp5蛋白是由196个氨基酸残基组成的多肽,其分子质量的理论值为21 820.07 u,理论等电点(pI)为8.734,略偏碱;二级结构骨架中α-螺旋(h)占55.61%,β-折叠(t)占7.65%,无规则卷曲(c)占20.92%,延伸链(e)占15.82%;Nsp5蛋白质的三级结构中,中间段以α-螺旋为主作为骨架,C端多个复杂二级结构构成该蛋白的酶活性中心;B细胞抗原表位的预测,表明有15个潜在的B细胞优势表位。本研究为猪流行性腹泻病毒Nsp5蛋白质的生物学功能相关研究提供数据支持。 相似文献
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子宫内膜炎是指子宫粘膜受到侵害而发生的炎症。它不仅影响母牛的正常生理功能,而且还会导致母牛长期不孕,甚至终生不孕,是提高受胎率的最大障碍。Barbu等报道,不孕牛中有70%患慢性或隐性子宫内膜炎。在国内,奶牛子宫内膜炎的发病率也很高,瞿自明等对16个城市41个奶牛场调查结果显示,奶牛子宫内膜炎发病率为17.26%,占不孕牛的68.34%。在金华,显性子宫内膜炎也占不孕牛的38.6%。 相似文献
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猪圆环病毒2型(PCV2)是一种引起仔猪Sus scrofa多系统衰竭综合征、免疫抑制、皮肤肾病综合征等疾病的病原体。根据GenBank中PCV2 ORF1基因序列设计合成特异性引物和探针,以PCV2基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段,并将目的片段克隆至pMD18-T载体,构建阳性标准品。以阳性标准品为模板,优化荧光定量PCR反应条件,建立标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性验证,并应用此方法对临床样品进行检测。结果表明:阳性质粒标准品构建成功,该检测方法的引物与探针的最佳浓度皆为0.2 μmol·L-1,线性检测范围为2.1×1013~2.1×106拷贝·L-1,最低检测限值为8.828×106拷贝·L-1,且与其他相关疾病无交叉反应;各批次检测变异系数低,检测方法稳定性好。本研究建立的敏感性高、特异性好的实时荧光定量PCR方法,为PCV2的快速检测提供了新工具。 相似文献
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<正> 在两年试验中,对15年生M11砧金冠苹果树,从开花起每隔1周喷布一次0.05%,0.075%和0.1%GA_(4+7),或0.7%可湿性硫磺+0.2%高岭土+0.05%Solubor(溶剂)混合物,共喷布5~7次。1984年,喷布0.1%GA_(4+7)的处理果锈最少, 相似文献
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2007~2012年浙江省及周边地区猪圆环病毒2型(PCV2)分子流行病学调查 总被引:2,自引:0,他引:2
为了进一步探索浙江省及周边地区猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的分子进化特征。本研究运用实验室已建立的PCR方法,采集2007~2012年期间浙江省及周边地区疑似PCV2感染的180份病例的肺脏、脾脏及淋巴结,并制成混合的组织样本,进行猪PCV2感染情况检测,并抽提组织细胞DNA作为模板,进行PCV2目的片段的全基因组扩增及测序,研究结果表明:浙江省及周边地区PCV2在2007~2012年阳性率分别为41.7%、52.0%、44.1%、37.0%、40.5%和33.3%,总阳性率41.4%。与以往相比,PCV2感染率基本保持一致。随机选取的45份阳性病料PCV2全基因组测序结果显示,45个毒株均属于Group1(PCV2b),很显然,浙江省及周边地区PCV2的主导基因型依然是Group1。45个毒株中属于1A分支的有11个毒株,属于1B分支的有10个毒株,属于1C分支的有22个毒株,所占比例分别是23.9%、21.7%和47.8%,同时发现随着PCV2在本地区的流行,1C分支从无到有,且在其中的比例也越来赿高,并逐步占据主导地位。对PCV2毒株Cap变异的分析能更好掌握检测区域毒株同源性情况。 相似文献
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<正> 罹短枝枯顶病的梨树于7月份表现叶脉失绿,顶部叶片畸形,顶梢和侧梢枯顶,并产生裂果。发病果园土壤的硼含量(0.56ppm)高于一般果园(0.14ppm)。罹病植株叶的硼含量达120ppm,而正常植株叶的硼含量仅39ppm。在高硼条件下(>0.5ppm)砂培的植株表现出与感病果园植株相同的症状,其叶的硼含量达122.2ppm,新梢皮部的硼含量高达166ppm。高硼处理导致叶中钾含量降低和磷含量增加,但对叶中钙、氮和镁含量没有影响。认为梨新梢枯顶是由硼毒害所致。(文摘号5510) 译自(英)《园艺学文摘》1988年第58卷第9期译者:吴瑗 相似文献