犬冠状病毒TN449株M基因的克隆与转移载体的构建

用蔗糖密度梯度离心纯化犬冠状病毒TN449株病毒液，提取总RNA并反转录，同时设计1对5’端加有BamHⅠ和HindⅢ内切酶位点的引物，对病毒cDNA进行了PCR扩增，回收PCR产物将其连接入pGEM-T Easy载体并转化大肠埃希氏菌。并对阳性重组质粒菌测序和序列分析。结果，犬冠状病毒与牛冠状病毒、猫冠状病毒、猫传染性腹膜炎病毒、人冠状病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鼠传染性肝炎病毒、猪呼吸道冠状病毒、人重症急性呼吸道综合征病毒和猪胃肠炎病毒的同源性分别是39．39％、85．41％、83．98％、36．80％、26．64％、37．23％、93．51％、29．009／5和94．81％；犬冠状病毒M蛋白有3个疏水性结构域。同时构建了pET28a-CCV-M表达质粒。     

肠道出血综合征研究进展

肠道出血综合征(HBS)是近年来发现的反刍动物的肠道疾病,其原因不甚明了。而从俄勒冈大学的实验中意外地发现,在HBS患病奶牛和对照奶牛的饲料、胃肠内容物、胃肠壁、淋巴结和血液等病料中都检测到烟曲霉菌和梭菌,怀疑这两种微生物可能是HBS的致病病原。经进一步研究表明,在HBS病牛和对照奶牛中都检测到梭菌毒素基因,而烟曲霉菌只在患病奶牛中检测到,对照牛则呈阴性。由此可见,烟曲霉菌与HBS之间具有密切的联系,烟曲霉菌很可能就是HBS的一个重要的病原学因素。目前,已有一种称为OmniGen-AF的产品可有效预防HBS的发生。     

动物冠状病毒通用PCR方法的建立及基因序列分析

参考GenBank中公布的冠状病毒相关序列,根据动物冠状病毒聚合酶基因的保守区段设计一对通用引物。用这对引物对犬冠状病毒、猫冠状病毒等8种动物冠状病毒的cDNA模板进行通用PCR扩增和通用PCR反应条件的优化,结果均得到与试验设计相符的449 bp条带;特异性试验结果表明犬冠状病毒、猫冠状病毒等均扩增出449 bp目的条带,而阴性对照没有。敏感性试验结果表明,其敏感程度与常规PCR方法相同。将扩增的聚合酶基因与冠状病毒的参考毒株进行同源性比对,同源率在56.69%～99.55%之间。进化树分析结果与文献中对冠状病毒根据血清学与基因学角度分类报道相一致。