黑曲霉超临界萃取物抑制链格孢作用机制的初步研究

本试验对黑曲霉菌丝体超临界萃取物(SE)抑制链格孢的机制进行了初步研究。采用超临界萃取从黑曲霉菌丝体中获得样品SE,使用气相色谱-质谱(GC-MS)对其萃取物进行分离鉴定,并通过细胞膜渗透性测定、核酸和总蛋白含量测定、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染色法、活性氧(ROS)含量测定、呼吸代谢途径等方法对SE的抑菌机制进行研究;电导率及核酸、蛋白结果显示,SE能影响链格孢细胞膜的完整性,SE处理菌体4.5 h,电导率比阴性对照增加了37.2%,胞外核酸蛋白含量显著增加。DAPI染色结果显示,DAPI可以和链格孢内的核酸结合,经SE作用30 min,SE可引起细胞核染色质异常弥散。ROS试验结果显示,SE可以激发菌体产生过多的活性氧,SE作用链格孢40 min时ROS含量比阴性对照增加了79.67%。呼吸代谢试验结果显示,SE能抑制三羧酸循环(TCA)中的琥珀酸脱氢酶的活性,其抑制率为35.4%。SE具有较强的抑菌活性,其抑菌机制是通过影响细胞膜的正常功能、损伤细胞结构和抑制真菌的呼吸代谢等方面实现的。     

贵州岩溶山区野生天蓝苜蓿根瘤菌资源发掘、固氮特性及其多样性研究

天蓝苜蓿(Medicago lupulina)是一种广为分布的优良野生豆科饲草植物。为了发掘贵州岩溶山区天蓝苜蓿特定的根瘤菌资源，筛选获得固氮促生能力强、寄主识别范围广的高效抗逆天蓝苜蓿根瘤菌，从贵州省19个县(市)4个不同生态功能区采集天蓝苜蓿根瘤样品，经分离、纯化、菌体形态观察、16S rRNA基因序列比对分析，获得69个根瘤菌保存菌株。区系分析结果表明，分离菌株分属6属25种，其中中华根瘤菌属(Sinorhizobium)的分布频率高达55.71%，为优势属，草木樨中华根瘤菌(S.meliloti)分布频率达到38.51%，为优势种。选择来自不同地域、不同种类的天蓝苜蓿根瘤菌28株，采用百脉根盆栽回接方法，结合菌株固氮酶活性的测定，筛选出优良促生固氮根瘤菌9株，其中5个菌株的酶活力及植物促生效果与另外4株的差异均达显著(P<0.05)或极显著水平(P<0.01)，为最优促生根瘤菌。本研究结果可为区域草业发展及生态环境建设提供共生微生物资源。