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黑腹果蝇抗真菌肽Drs及其同系物基因的原核表达与蛋白纯化研究 总被引:2,自引:1,他引:2
【目的】Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外,在黑腹果蝇基因组中,还存在另外6条Drs同系物的基因序列,对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSαβ模体结构。为鉴定Drs及其6个同系物的抗性功能差异,研究其分子结构与功能的关系,需要对这些同系物基因进行克隆表达,获得有生物学活性的纯化样品。【方法】本文采用PCR分段互补合成的方法准确地获得了Drs同系物基因,并克隆至pET-3C载体上,转化到宿主菌E.coli Origami(DE3)中进行诱导表达,表达产物经阳离子CM SepharoseTM Fast Flow层析、凝胶过滤Sephacryl S-100 High Resolution层析和包涵体的复性及Sephadex G-25脱盐等纯化处理后,进行抑菌活性检测。【结果】经纯化的7个Drs同系物的短肽样品,除Drs-lI外,其它的Drs同系物样品对供试真菌水稻立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)均有较强的抑制作用。【结论】表明本研究中使用的纯化及复性方法对具有多个二硫键的小分子多肽是比较有效的。 相似文献
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[目的]获得蚕蛹蛋白高效分解菌,探索其有关酶学性质。[方法]从腐败蚕蛹中采用稀释平板分离蛋白高效分解菌。先进行菌株的初筛:取采集的样品2g,分别加入装有LB培养基的摇瓶中,置摇床上180r/min,37℃培养4~5d。将发酵液稀释一定倍数,涂布法进行分离,根据酪素培养基中单菌落透明圈和菌落直径比值(H/C)大小,选取H/C比值较大的菌株进行复筛。将初筛得到的待测菌株接种于发酵培养基中,32℃摇床培养60h。发酵液离心(4000r/min,5min)后取上清,测定酶活力,并比较不同菌株发酵液蛋白酶pH、温度作用范围。对筛选出的菌株所产中性蛋白酶再进行pH值条件下酶活力稳定性测验,酶活力热稳定性试验,及不同金属离子对中性蛋白酶活力的影响试验。蚕蛹粉采用筛选出的菌株固体发酵后,于60℃烘箱烘干,测定其中小分子蛋白含量。[结果]经筛选得到1株产中性蛋白酶的KB细菌,在摇瓶发酵条件下其酶活达到589.08U/ml,发酵蚕蛹粉后中小分子蛋白含量达到15.09%,比未发酵的对照和实验室现用菌株发酵分别提高了95.72%和15.67%,这表明KB菌株在蚕蛹粉发酵中优于实验室现用菌株。KB菌株所产中性蛋白酶在pH值6.5~9.0条件较稳定,pH值8.0为其最适pH值,在pH值8.0、温度55℃条件下处理0~30min时的酶活较稳定,残余酶活力在90.0%以上。[结论]初步获得蚕蛹蛋白高效分解菌。 相似文献
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利用甜玉米秸秆和玉米芯发酵生产纤维素酶的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
甜玉米(Zea mays L.)是广东省的主栽作物之一,广东省甜玉米每年的种植面积约2万hm^2。近年来,广东省甜玉米已逐渐形成基地化产业化的生产规模。在甜玉米深加工过程中,大量的副产物甜玉米秸秆和玉米芯便不断地产生,约占鲜果60%~70%的比例;大量的副产物(如秸秆和玉米芯)若得不到及时处理,将会污染环境。玉米秸秆和玉米芯都含有一定的营养成分,其中玉米秸秆干物质中含有无氮浸出物为42.7%,粗纤维33.4%,粗蛋白质3.5%; 相似文献
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选择体型、体重相近的6周龄的240只山地鸡,随机分成4组,其中空白对照组饲喂基础日粮,另外3组在基础日粮的基础上分别添加3%、6%和9%的虎杖渣粉,经过3周试验,考察虎杖渣粉对山地鸡生长性能、免疫器官和血液生化指标的影响。结果表明,饲喂虎杖渣粉的山地鸡日增重出现一定程度的下降,但差异不显著。处理组中胸腺指数最高增加了17.4%,脾脏指数最高增加了28.1%,法氏囊指数最高增加了31.7%。各处理组血液生化指标的变化均不显著,表明虎杖渣粉作为饲料添加剂使用时不会对山地鸡产生不利的影响,虽然饲喂过量虎杖渣粉不会提高山地鸡的生长性能,但可以提高山地鸡的免疫力,降低发病率,因此适合山区、林地等山地鸡的养殖。 相似文献
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