华蟾毒精对B16及RMA-S细胞主要组织相容性复合体Ⅰ类分子及其相关基因表达的影响

试验旨在考察华蟾毒精（CBG）单体对B16和RMA-S细胞MHC-Ⅰ类分子及其相关基因表达的影响。通过MTT法检测CBG对B16和RMA-S细胞生长的影响;流式细胞术检测CBG对B16和RMA-S细胞表面MHC-Ⅰ分子表达的影响;荧光定量PCR检测CBG对B16和RMA-S细胞蛋白酶体相关基因（LMP2、LMP7）和ATP结合盒（ATP-binding cassette,ABC）转运蛋白（TAP1、TAP2）基因mRNA表达的影响。结果显示,CBG对B16和RMA-S细胞MHC-Ⅰ表达的影响均不显著(P＞0.05),但高浓度CBG可不同程度提高LMP2、LMP7、TAP1、TAP2基因mRNA表达水平。结果表明,CBG可能具有通过上调LMP2、LMP7、TAP1、TAP2基因表达水平来增强肿瘤自身免疫原性的潜能。     

鱼腥草素钠对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用

为了研究鱼腥草素钠对金黄色葡萄球菌(S.aureus)生物被膜的抑制活性,试验采用微量稀释法考察了鱼腥草素钠对S.aureus浮游菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),用琼脂平板法测定了其对生物被膜的最小抑膜浓度(MBIC)和最小杀膜浓度(MBBC);通过激光共聚焦显微镜考察了鱼腥草素钠对生物被膜的清除能力;通过Western-blot考察了鱼腥草素钠对S.aureus毒力因子分泌的影响。结果表明:鱼腥草素钠对浮游菌有很好的抑制作用(MIC、MBC:16~64μg/mL),对成熟的生物被膜没有明显的抑制作用(MBIC、MBBC1 024μg/mL),但其亚抑菌浓度在生物被膜形成早期有显著抑制作用,并呈剂量依赖抑制α-溶血素、肠毒素A和肠毒素B的分泌。说明鱼腥草素钠对金黄色葡萄球菌浮游菌和早期生物被膜有较好抑制活性。     

桃柁酚对金黄色葡萄球菌生物膜形成及cidA表达的影响

为研究桃柁酚对金黄色葡萄球菌(S.aureus)生物膜形成的影响及其机制,本研究通过结晶紫半定量法和激光共聚焦显微镜检测桃柁酚对S.aureus生物膜形成的影响,利用实时定量RT-PCR分析桃柁酚对cidA及其调控基因的作用,并测定了桃柁酚对胞外DNA (eDNA)释放的作用及对HaCaT细胞的细胞毒性.结果表明,桃柁酚可以有效减少eDNA的释放并抑制S.aureus生物膜的形成,并且抑制趋势呈剂量依赖关系.此外,在1/8×MIC药物浓度时,桃柁酚可以诱导eDNA的释放并诱导生物膜形成.桃柁酚可以通过影响agr和sar调控系统,作用于cidA基因进而影响eDNA释放及生物被膜的形成.而且,4×MIC浓度的桃柁酚对人体无毒害作用.本研究为治疗S.aureus感染提供新的方法,并为进一步研究桃柁酚的作用机制奠定了基础.     

金黄色葡萄球菌毒力因子PSM-α的4个基因串联融合表达及其对人中性粒细胞的生物学作用

酚可溶性调控蛋白(PSM)是一种新发现的金黄色葡萄球菌(S.aureus)细胞外分泌蛋白,为研究其对人中性粒细胞的生物学作用,本研究通过设计linker将其中编码PSM-α蛋白的PSM-α1、PSM-α2、PSM-α3、PSM-α4基因串联,并克隆于pGEX-4T-1中。重组菌经IPTG诱导,重组蛋白以可溶形式高效表达。通过Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化并用凝血酶切除其GST标签,得到的蛋白作用于正常人的中性粒细胞,通过ELISA检测细胞因子IL-1β及IL-8的含量。结果显示,纯化后蛋白刺激中性粒细胞后,IL-8含量显著升高。结果证明,串联表达后的PSM-α蛋白可以刺激中性粒细胞释放炎性因子,诱导炎症的发生,产生致病作用。     

纳米磷酸三钙/明胶/鹿茸多肽复合材料的制备及对人成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

探讨反相微乳液法制备的β-纳米磷酸三钙/明胶/鹿茸多肽复合材料(简称纳米复合材料)对人成骨细胞功能的影响.利用反相微乳液法制备纳米复合材料,扫描电镜观察其形态,EDX与SELDI-TOF-MS分析对复合材料进行表征.采用MTT比色法、茜素红染色法检测纳米复合材料对体外培养的人成骨细胞hFOB1.19的增殖、矿化结节形成的影响;采用全自动生化分析仪检测hFOB细胞碱性磷酸酶活性(ALP).结果表明该纳米复合材料可促进人成骨细胞增殖,提高ALP活性并增加矿化结节形成的数量,可促进人成骨细胞的增殖、分化成熟及矿化.     

柴胡皂甙D通过非mTOR依赖途径诱导HeLa细胞自噬

为了研究柴胡皂甙D能否诱导HeLa细胞发生自噬,并初步探讨其机制,试验采用激光共聚焦显微镜、免疫印记等技术评价经柴胡皂甙D处理后的HeLa细胞的自噬水平。结果表明:经柴胡皂甙D处理后,激光共聚焦显微镜观察到GFP-LC3斑点显著增加;柴胡皂甙D能显著增加LC3-Ⅱ的表达;但自噬关键蛋白mTOR没有变化。说明柴胡皂甙D能诱导HeLa细胞发生自噬,并通过非mTOR依赖途径。     

骆驼蓬灵单独和与洗必泰联合对抗金黄色葡萄球菌悬浮菌和生物膜的抗菌活性研究

采用微量稀释法测骆驼蓬灵和洗必泰(CHG)单独抗金黄色葡萄球菌悬浮菌和生物膜的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);棋盘稀释法测定两种药物联合时的协同效果;以及激光共聚焦采集图片检测部分联合的效果。结果表明,骆驼蓬灵和CHG联合具有协同抗菌效果。在悬浮菌试验中,9株显示抗浮游菌协同活性,在生物膜试验中,11株显示协同抗生物膜活性。其余菌株显示相加活性,本试验中无颉颃作用。初步探索了体外试验协同作用的原因,为克服金黄色葡萄球菌耐药提供了一个可供选择的方法。