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为了制备能特异性识别伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)被膜蛋白pUL11和pUL16的单克隆抗体并初步评估其应用潜力,试验采用原核表达系统表达并纯化了PRV HLJ-2013毒株的pUL11和pUL16可溶性重组蛋白,对重组蛋白进行纯化,分别以两种纯化蛋白作为免疫原经皮下注射免疫小鼠制备单克隆抗体,并将该单克隆抗体与PRV HLJ-2013和单纯疱疹病毒1型(HSV-1)共孵育以确定其特异性。结果表明：试验采用原核表达系统成功表达并纯化了PRV HLJ-2013毒株的pUL11和pUL16可溶性重组蛋白,成功获得了pUL11的单克隆抗体11-3和pUL16的单克隆抗体16-13,11-3和16-13的腹水抗体效价分别为1∶25 600和1∶51 200;两株单克隆抗体均可与PRV及HSV-1感染的Vero细胞发生特异性反应。说明试验成功制备了pUL11和pUL16蛋白的单克隆抗体,该单克隆抗体具有较好的特异性。 相似文献
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为建立一种灵敏、特异且高效的检测盖他病毒(GETV)的TaqMan荧光定量RT-PCR方法，本研究根据GETV的nsP3基因设计特异性引物及探针，以GETV (SC483株) cDNA作为模板，扩增目的基因并克隆至p ET-29a载体中，构建重组质粒标准品p ET29a-nsP3并经PCR和测序鉴定。基于该质粒标准品，采用方阵法优化引物、探针浓度以及退火温度，初步建立了一种基于GETV nsP3基因的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法，并绘制标准曲线。以GETV (SC483株、SC266株)、辛德毕斯病毒(SINV)、猪流感病毒(H3N2、SIV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)等病毒的基因组RNA反转录为cDNA作为模板，利用本实验建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测，结果显示，仅GETV为阳性，SINV、SIV、TGEV、PEDV、PRRSV均为阴性，表明该方法特异性较强；分别以10倍倍比稀释(3.07×10-1拷贝/μL～3.07×108拷贝/μL... 相似文献
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