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外植体采集时期与冷藏处理对马尾松愈伤组织诱导的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
马尾松(Pinus massoniana)无性繁殖困难,研究常采用体细胞胚胎发生和器官发生的方式繁殖,外植体采集时期是实验成功的关键.本实验采用2011年10月至2012年10月期间(每周或每两周采集1次)采集的马尾松枝梢顶端分生组织为外植体,并将外植体置于4cC冰箱冷藏做不同冷藏时间处理(4 ~ 114天).处理后的外植体接种在添加不同激素浓度的改良GD培养基中,24 ~ 25℃条件下暗培养.实验结果表明:冷藏时间对马尾松愈伤组织诱导没有显著影响;2012年3月中旬至4月底采集的马尾松外植体,愈伤组织诱导率最高达89.8%,其平均诱导率达到80%以上;外植体经流水冲洗2~3h、75%的酒精处理20 ~30 s、0.1%的升汞处理9~ 10 min并去除鳞片和针叶,能有效降低外植体污染率;外植体经流水冲洗2~3h、去除鳞片和针叶后切成长约0.2 ~0.5 cm的薄片后接种,能大大降低培养过程中外植体的褐化率. 相似文献
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本研究利用马尾松未成熟胚诱导的胚性愈伤组织,首次建立马尾松胚性愈伤组织悬浮增殖培养体系。实验中定期对细胞生长参数沉淀细胞体积(SCV)、细胞活力进行了测定,研究了初始接种量,继代细胞密度对悬浮增殖培养体系建立的影响。研究结果表明:不同初始接种量、继代转接细胞密度显著地影响马尾松胚性细胞悬浮培养的效果;在悬浮培育过程中,胚性细胞的生长周期曲线呈"S"型,细胞活力呈现先急剧上升,后缓慢下降的趋势;本研究建立的马尾松胚性细胞悬浮增殖培养体系为:在30 mL的培养基中,初始接种1.0 g胚性细胞(平均增殖系数达12.097),继代培育以1/6作为继代细胞密度,且继代周期为8~12 d为宜。本研究为优化调控马尾松体细胞胚胎发生胚性愈伤组织稳定增殖提供了技术支撑,同时为采用遗传转化及细胞融合等技术进行马尾松新品种选育奠定了研究基础。 相似文献
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