猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性.试验结果表明,转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异,说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用.     

新城疫病毒F48E9株NP基因的克隆与序列分析

根据NDV NP蛋白已知基因序列设计合成了一对引物，利用RT-PCR扩增出了F48E9株NP基因1598bp的片段，将该片段克隆到pMD18-T Vector上，并对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定，结果证明我们得到了这个基因片段的阳性重组子。为了更充分证实所得阳性质粒的可靠性，采用Sanger's双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定，获得了F48E9株NP基因片段的基因序列，利用DNASIS分析软件，将F48E9株与La Sota株的相应序列进行比较，其核苷酸序列同源性为88.2%。至此，我们获得了F48E9株NP基因的全长克隆。     

新城疫病毒F48E9感染CEF细胞特异性表达基因的筛选鉴定

分别以NDV F48E9和La Sota株感染鸡胚成纤维细胞,于感染后8 h提取NDV感染CEF细胞总RNA,通过mRNA差异显示技术筛选病毒感染诱导表达的特异性基因.主要方法是先以锚定引物经反转录后,然后以9～10 bp随机引物为上游引物,以锚定引物Oligod(T)18为下游引物,进行PCR扩增,PCR产物采用8%的尿素变性PAGE胶电泳进行分离鉴定.对于特征性差异带进行第二次PCR扩增,克隆后测定其核苷酸序列.结果我们发现数个差异条带,选取差异带在500 bp以内的条带,经测序后显示经NDV F48E9感染后,有一条差异条带特异性表达的基因所编码的蛋白与Receptor(TNFRSF)-interacting serine-threonine kinase 2有47 %同源,是一个新基因,其蛋白功能不明确,有可能和细胞的凋亡有关.     

新城疫病毒的反遗传操作技术研究进展

鸡新城疫 (ＮＤ)是由ＮＤＶ引起的鸡和火鸡的急性高度接触性传染病 ,是严重危害养鸡业的最重要的疾病之一 ,我国每年因此造成的损失极其严重。尽管常规疫苗基本控制了该病的大规模毁灭性流行 ,但并没有使ＮＤ得到根本控制。新城疫 (ＮＤ)是危害世界养禽业的最严重的禽病之一 ,所造成的经济损失十分惨重。它的病原是新城疫病毒(ＮＤＶ) ,属于副粘病毒科副粘病毒亚科腮腺炎病毒属。同其它副粘病毒一样 ,ＮＤＶ含有单股负链基因组ＲＮＡ ,长度约15 186个碱基 ,编码 6种结构蛋白 :核衣壳蛋白 (ＮＰ)、磷蛋白(Ｐ)、基质蛋白 (Ｍ)、融合蛋白 (Ｆ)…     

新城疫La Sota、V4疫苗免疫鸡和免疫攻毒鸡的特异性IgA抗体动态变化规律比较

应用间接ELISA对新城疫LaSota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的IgA抗体动态变化进行了测定和比较。试验表明，LaSota和V4免疫鸡泪液中特异性IgA均在免疫后第5天出现，8天开始明显升高，与血清中IgG出现时间相似，免疫后21天达到高峰。LaSota免疫鸡的泪液IgA抗体水平略高于V4免疫鸡；而两免疫组哈德氏腺(HG)中的特异性IgA高峰出现较迟。免疫攻毒鸡泪液中的特异性IgA抗体水平均先呈短暂的升高，之后下降的趋势，而HG中的IgA则首先表现降低，之后很快升高，5天后趋于下降，两攻毒组差异不显著，对IgA回忆应答均不明显。     

新城疫F48E9株L基因克隆与鉴定

本实验根据已知新城疫病毒L基因序列分别设计了两对引物，引物1（L1）、引物2（L2）、引物2（L2）、引物3（L3）、引物4（L4），以L1/L2为引物可以扩出4050bpF48E9株L基因的A片段（LA），以L3/L4为引物可扩增出3504bpE48E9株L基因的B片段（LB）。LA和LB2个片段经特异性双酶切后用T4DNA连接酶连接成完整的F48E9株L基因并克隆到pMD18-T载体中，对克隆后L基因5’端、3’端和连接点处的核苷酸序列进行了测定，经DNASIS软件分析表明为NDVL基因，证明我们获得了F48E9株L基因。     

银狐生长激素成熟mRNA真核表达载体的构建

用PCR方法，从含有银狐生长激素mRNA的阳性重组质粒pMD18-T-IGH中亚克隆出生长激素基因，然后定向插入到真核表达载体pcDNA3．1( )中，通过酶切、质粒PCR和序列测定对质粒进行鉴定表明，成功构建了银狐生长激素成熟mRNA真核表达质粒pcDNA3．1-IGH．     

鸭疫里默氏杆菌疫苗的研究概况

鸭疫里默杆菌病由鸭疫里默氏杆菌（Riemerlaanatipes—tifer,RA）引起鸭的主要细菌性传染病之一,药物预防和免疫预防是我国目前控制该病的主要措施,但药敏试验表明RA已对生产上的大多常用药物产生耐药性。近些年来,国内外学者都致力于RA疫苗的研究,目前国内外研制成的RA疫苗有单价和多价灭活菌苗、弱毒疫苗和亚单位疫苗等。由于RA血清型众多,各血清型间无明显交叉保护力,再加之不同地区间流行的血清型也不一致,商品化的RA疫苗虽具有一定的应用前景,但疫苗缺乏普遍性,具有一定区域局限性,往往造成疫苗免疫效果欠佳,从而影响了疫情的防控。本文综述了RA疫苗研究现状,并探讨RA疫苗今后的研究方向。     

鸡新城疫病毒强弱毒株RT_PCR鉴别诊断方法

本研究通过对大量不同毒力ＮＤＶ Ｆ基因核苷酸序列分析,根据毒力和序列间的相关规律,分别设计合成了两组引物,建立一个可以迅速鉴别ＮＤＶ强、弱毒株的ＲＴ－ＰＣＲ方法,对强毒株可扩增出１３３ｂｐ的特异性片段的３６２ｂｐ的通用片段,弱毒株可以扩增出２５２ｂｐ的特异性片段的３６２ｂｐ的通用片段。只需一个ＲＴ－ＰＣＲ反应,整个实验过程可在５小时内完成。敏感性测定结果表明该方法的最低检出量不低于５００ｐｇ的ＤＮＶ ＲＮＡ。为了增加方法的实用性,我们进一步建立了直接从组织病料中检测并鉴别强弱毒株的方法。     

不同免疫程序新城疫抗体消长规律分析

新城疫一直是严重危害我国养禽业的重要疾病,疫苗免疫是预防该病的主要手段[1].新城疫的免疫主要以体液免疫应答为主,疫苗主要有弱毒疫苗和灭活疫苗两种,应用中通过优化两种疫苗的免疫程序获得高水平而且持久的抗体来减少新城疫对家禽的危害.