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[目的]为临床研究和治疗某些病原微生物引起的感染提供依据。[方法]参照LfcinB的氨基酸序列,利用化学合成法合成LfcinB基因并克隆到pPIC9K载体中,转化到酵母菌GS115感受态细胞中,用抗性选择标记G418筛选出高拷贝酵母菌转化子。利用甲醇诱导表达重组LfcinB,经Tricine-SDS-PAGE电泳检测目的蛋白牛乳铁蛋白素的表达情况,同时通过体外抑菌试验检测表达产物的抑菌活性。[结果]提取的酵母菌DNA扩增出1条预期的560bp左右的特异性条带。目的基因已经成功克隆到pPIC9K载体中,并转到酵母菌GS115中而且获得了表达。重组酵母表达上清中牛乳铁蛋白素抗菌肽对沙门氏肠炎杆菌的抗菌活性为42.857IU/ml,表明LfcinB基因的酵母表达载体构建成功。[结论]该研究证明利用化学合成法直接合成编码LfcinB的DNA构建真核表达载体、通过生物发酵工程来制备LfcinB是可行的。 相似文献
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根据GenBank中鸡IFN—α序列设计引物对,利用PCR技术克隆并测定了莱航鸡(SPY)的IFN-α基因,命名ChIFN-S1,与GenBank中IFN-α比较,ORF长度均为582个核苷酸,其成熟肽包含162个氨基酸,相互间同源性在98.8%-99.8%。将其成熟肽基因序列克隆入pQE30表达载体后,通过ITPG诱导,收集菌体高压破碎后提取包涵体并进行初步纯化,利用胱氨酸.半胱氨酸再氧化还原法对纯化后的变性液进行分段稀释法复性。细胞病变抑制法(CEF-VSV为检测系统)测定复性液的抗病毒比活性高达10^9U/mg以上. 相似文献
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荧光抗体法检测猪细小病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)为引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一.猪细小病毒感染的主要特征是孕猪在怀孕前容易受到感染,可引起胚胎或胎儿的感染和死亡,导致母猪发生流产,死胎,胎儿木乃伊化及新生仔猪的死亡.目前,国内外检测猪细小病毒的方法主要有原位杂交、银加胶体金检测法、ELISA双抗体夹心法、聚合酶链反应和荧光抗体法等.免疫荧光技术是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应.笔者认为荧光抗体法较适用,而关于此方法的报道甚少,因此进行了以寻求快速、特异的直接荧光抗体检测方法为目的的研究. 相似文献
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1 鸡群及发病情况介绍 2002年9月21日早起,河间市行别营乡小史鸡场沈某给鸡喂料时,从鸡舍捡出13只死鸡。之前无任何症状,还投过几天阿莫西林。此鸡群有2200羽,240日龄左右,正处于产蛋高峰期。此养殖户非常着急,前来就诊。 相似文献
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目前,许多国家严格禁止抗生素及化学类抗菌抗病毒药物应用于食品动物,故寻求安全、无危害的饲料添加剂迫在眉睫。在家禽生产中采用新型中 相似文献
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以牛乳素为目的基因,构建舍有组氨酸标签、人生长激素信号肽的真核表达栽体,为利用牛乳素在活体动物及培养细胞中的表达提供基因材料.用人工合成hGH-Lacf B的序列与T栽体连接,用Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后与相应酶切处理的pVAX1连接,取阳性克隆质粒,用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切回收舍hGH的pVAX1载体,再与经过PCR扩增的his-Lacf B连接,酶切鉴定及测序.DNA序列分析表明,携带hGH、6xhis和目的基因Lacf B已成功连接到真核表达栽体pVAX1中. 相似文献