基于UPLC-Q-TOF-MS的马蹄地上茎化学成分分析

以马蹄地上茎为原料,采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）分析其化学成分。使用ACQUITY UPLC HSS T3液相色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.8μm）,以0.1%甲酸水（A）-0.1%甲酸乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱;采用电喷雾电离源（electron spray ionization,ESI）,正负离子模式扫描。通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片,对所得成分的主要色谱峰进行鉴定。结果共鉴定出66个化学成分,包括30个黄酮类、4个生物碱类、15个有机酸类、7个酯类、2个蒽醌类、4个醛类、2个醇类、1个苯丙素类,为进一步阐释其药效物质及作用机制提供依据。     

三重 PCR 快速检测 H7N9 亚型流感病毒方法的建立

为建立简便快速检测H7N9亚型流感病毒的方法,根椐GenBank中H7亚型流感病毒的HA基因、N9亚型流感病毒的NA基因和所有亚型流感病毒M基因的保守序列,分别设计了3对特异性引物,优化反应条件,并通过特异性试验、敏感性试验,建立了H7N9亚型流感病毒三重PCR检测方法。利用该法对H7N9亚型流感病毒进行扩增,可得到3条特异性条带(HA基因304bp,NA基因160bp,M基因458bp),其他亚型流感病毒只出现1条特异性条带,大小为458bp,对其他病原体的检测均无扩增条带。敏感性试验结果表明,该法最低能检测到0.6pgH7N9亚型流感病毒。用该法对470个样品进行检测,未发现H7N9亚型流感病毒。该法具有快速、敏感和特异等优点,可为临床检测和疾控防控提供技术支持。     

猪圆环病毒2型ORF2重组腺病毒的构建与鉴定及其免疫效果研究

为了研究含有猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的重组腺病毒作为基因工程疫苗的潜在应用价值,本试验根据GenBank中猪圆环病毒2型基因序列,设计了1对引物,用于猪圆环病毒2型ORF2基因的扩增。将目的基因T/A克隆后,亚克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV,构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-ORF2。经PCR方法和限制性内切酶酶切法及测序证明该基因已成功连接后,重组腺病毒转移载体经PmeⅠ酶切线性化,在BJ5183细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-CMV-ORF2。经PCR方法和PacⅠ酶切方法及测序鉴定表明该重组腺病毒载体已构建成功。PacⅠ酶切线性化pAd-CMV-ORF2,脂质体法转染AD293细胞进行病毒的包装和扩增。PCR及RT-PCR、IFA、Western blotting检测目的基因及其表达。结果表明,本试验成功构建了重组腺病毒pAd-CMV-ORF2。3次噬斑试验纯化重组腺病毒,测得其TCID50为10-8.75/0.1 mL。将重组腺病毒接种SPF级雌性BALB/c小鼠,用ELISA抗体检测试剂盒检测特异性抗体水平。小鼠免疫试验测得其特异性抗体水平较高,为PCV2重组腺病毒基因工程疫苗的进一步研究打下基础。     

猪γ干扰素基因重组腺病毒的构建与鉴定

干扰素-γ(INF-γ)又称Ⅱ干扰素,主要是由活化的CD4+、CD8+等T淋巴细胞和NK细胞产生的一种细胞因子[1-2],猪γ干扰素全基因为501个碱基,编码166个氨基酸,前23个氨基酸为信号肽,后143个氨基酸为活性成熟蛋白,天然活性状态为同源二聚体,而单体形式没有生物学活性[3].     

腺病毒载体的研究进展

叙述了腺病毒的生物特性、腺病毒载体的发展进程和构建策略、在动物疫苗研究中的应用及其优势,同时阐述了腺病毒载体遇到的免疫学问题,并对腺病毒载体进行了展望,随着动物腺病毒载体的发展,它必将在控制人和动物传染病,特别是在病毒性传染病中发挥越来越重要的作用。     

薏米蛋糕的配方优化研究

[目的]研究优化薏米蛋糕的配方。[方法]通过单因素试验和正交试验,探讨了薏米粉添加量、色拉油添加量、白砂糖添加量、水添加量、鸡全蛋液添加量、食盐添加量以及泡打粉添加量对薏米蛋糕品质的影响。[结果]最优配方中各种材料用量占加入面粉的比例如下:鸡全蛋液220%、白砂糖量100%、水用量为75%、色拉油用量为40%、薏米用量25%、双效泡打粉3%、食盐添加量2%。[结论]用该配方制作出的蛋糕表面油润,富有光泽,结构均匀,松软可口,具有纯正的薏米香味。