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为实现牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus, IBRV)精准的定量检测,以IBRV gB基因为靶基因,建立IBRV微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法,进行了ddPCR退火温度、引物和探针浓度的优化、特异性和灵敏性试验。结果显示,建立的ddPCR方法最佳退火温度为56.5℃;反应体系中最佳引物、探针浓度分别为900和250 nmol/L;能够实现IBRV的特异性检测,与其他常见的牛呼吸系统疫病病原无交叉反应;以重组质粒pMD19-T-gB为模板,ddPCR方法的检出限为1.8 copies/μL,是实时荧光PCR方法敏感性的10倍。对119份具有呼吸道症状的牛鼻拭子样本分别进行ddPCR方法和实时荧光PCR方法进行检测,结果显示,ddPCR方法和实时荧光PCR方法的检出率分别为(15.13%,18/119)和(12.60%,15/119)。本研究建立的ddPCR方法特异性强、灵敏度高,可作为牛呼吸道临床样品中IBRV精准定量检测的有效手段。  相似文献   
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