表达猪轮状病毒VP4基因重组乳酸球菌表达载体构建及免疫原性分析

 【目的】构建猪轮状病毒主要保护性抗原VP4基因的重组乳酸乳球菌口服疫苗,为猪轮状病毒的防治提供有效方法。【方法】将猪轮状病毒免疫保护性抗原基因VP4主要结构功能区定向插入乳酸菌表面表达载体pNZ8112,电转化乳酸乳球菌NZ9000,构建了pNZ8112/NZ9000乳酸乳球菌表面表达系统。通过SDS-PAGE、Western-blot和免疫荧光方法鉴定,以此活菌系统口服免疫6～8周龄Balb/c小鼠,测定了免疫动物的局部体液免疫和系统免疫应答。【结果】证明插入的外源基因在菌体表面得到了正确表达,表达猪轮状病毒免疫保护性抗原的重组乳酸乳球菌免疫动物后,分别在粪便、泪液和阴道洗液中检测到了特异性分泌型IgA抗体和在血液中检测到了IgG抗体的存在;体外细胞中和试验结果表明,血清抗体对猪轮状病毒的中和效价为1﹕40。【结论】表达猪轮状病毒免疫保护性抗原的重组乳酸乳球菌口服免疫动物能够产生良好的局部和系统体液免疫应答而且具有免疫中和效力。     

饲用酵母渐进加硒法及富硒效果研究

探讨渐进加硒法制备硒酵母的效果,硒添加量对饲用酵母的富硒量、产量及发酵液环境硒含量对其的影响。结果显示：渐进加硒法的富硒水平明显优于一次加硒方法,产量达641．69mg／100ml,酵母茵富集、转化有机硒的水平达634．28mg／kg;硒添加量在20mg／L之内时,饲用酵母富硒量与发酵液环境硒量成正相关,硒添加量〉20mg／L时,饲用酵母吸收无机硒转化成有机硒的能力将受到无机硒的毒性作用,影响饲用酵母菌正常的生长繁殖。结论：合理的渐进加硒法可以用于富硒酵母的制备。     

育成公鸭硝基苯急性毒性试验

本试验采用Weil′s平移法对金定育成公鸭进行硝基苯(NB)急性毒性试验。结果表明,NB对公鸭的经口急性中毒半数致死量(LD50)为447.20mg·kg-1BW,其可信区间为210.09-951.92mg·kg-1BW。急性中毒公鸭主要表现神经症状,剖检变化以腺胃胃壁增厚、黏膜脱落及肠道充血较明显。说明NB对公鸭具有较强的急性毒性作用。     

硝基苯致小鼠骨髓细胞的突变作用

为探讨硝基苯对哺乳动物的致突变性，将12周龄雄性昆明小鼠随机分为染毒组（26、52、104mg／kg）、空白对照组（生理盐水）、溶剂对照组（花生油）和阳性对照组（环磷酰胺），连续灌胃染毒7d，检测骨髓细胞微核率、骨髓细胞染色体畸变率以及外周血网织红细胞数。结果显示，随着染毒剂量的增加，骨髓细胞微核率、染色体畸变率均有增加，外周血网织红细胞数减少，各组与对照组差异均极显著（P〈0．01），并呈剂量-效应关系。表明，硝基苯可导致小鼠骨髓细胞发生突变。     

氯胺酮,安定复合麻醉对犬脑电图影响的研究

氯胺酮和安定复合麻醉，实验犬脑电图波幅显著升高，节律显著变慢，临床上出现肌肉松弛，痛觉和意识消失，为外科手术的适宜时期。     

抗氧化酶在硝基苯中毒小鼠睾丸细胞凋亡中的作用

将10周龄雄性昆明小鼠随机分为硝基苯染毒组（26mg／kg、52mg／kg、105mg／kg）、花生油溶剂对照组、生理盐水对照组。对各组试验小鼠进行处理后，于第30d检测小鼠血清和睾丸中SOD、GSH-Px、CAT的活性及MDA含量，并通过DNA Ladder条带和透射电镜检测睾丸细胞的凋亡。结果，染毒组血清及睾丸中SOD、GSH—Px、CAT的活性显著或极显著（P〈0.01或P〈0．05）低于溶剂对照组，MDA含量显著或极显著（P〈0．01或P〈0，05）高于溶剂对照组，染毒组均显示DNA Ladder条带；电镜下细胞核皱缩，异染色质边聚，呈现典型凋亡现象。结果表明，硝基苯中毒能够诱使睾丸发生氧化应激，进而导致睾丸细胞发生凋亡，抗氧化酶在睾丸细胞凋亡中具有一定的作用。     

乙酰胆碱酯酶在硝基苯致小鼠神经毒性中的作用

为探讨硝基苯中毒所致乙酰胆碱酯酶的变化规律，本试验用不同剂量的硝基苯对小鼠进行灌胃染毒，1次/d，共30 d，采用碱性羟胺比色法测定小鼠脑乙酰胆碱酯酶活性和肝乙酰胆碱含量，并在试验期间记录小鼠的临床表现。结果表明：染毒期间小鼠表现为行动迟缓、反应迟钝、抽搐及情绪异常如兴奋、敏感、不停跳跃等症状，随着染毒剂量的增加，时间的延长，中毒症状越明显；乙酰胆碱酯酶活性表现为明显的抑制作用，肝乙酰胆碱含量增加。结论：硝基苯具有神经毒性，能够抑制肝和脑乙酰胆碱酯酶活性，且表现为明显的剂量效应。     

硝基苯对小鼠急性毒性试验的研究

用Weil's表的平均移动法进行了NB对雌性小鼠和雄性小鼠LD_(50)的测定。以组间距(对数剂量差值)为d=0.2,测得NB对雄性小鼠经口服的LD_(50)为525.8962mg·kg~(-1)BW,95%可信限为417.7342～662.0640mg·kg~(-1)BW;以组间距(对数剂量差值)为d=0.0667,测得NB对雌性小鼠经口服的LD_(50)为771.9692mg·kg~(-1)BW,95%可信限为714.8254～833.6812mg·kg~(-1)BW。     

阿特拉津和毒死蜱对鲤鱼鳃组织细胞色素P450酶系影响

文章旨在检测暴露于不同浓度阿特拉津、毒死蜱及其混合物后,鲤鱼鳃细胞色素P450酶系水平。使用不同浓度阿特拉津(4.28、42.8和428μg·L-1)和毒死蜱(1.16、11.6和116μg·L-1)分别进行独立和联合染毒(1.13、11.3和113μg·L-1)普通鲤鱼试验。在暴露试验过程中,鳃组织细胞色素P450酶系在所有处理组均比相应对照组含量或活性要高;80 d恢复处理后,各恢复处理组细胞色素b5含量仍明显高于对照组;细胞色素C还原酶活性、苯胺-4-羟化酶活性升高不明显。结果有助于理解阿特拉津、毒死蜱及二者混合物亚慢性暴露时对鲤鱼鳃CYPs水平影响及其潜在性损伤。