H5N1亚型禽流感基质蛋白M1基因的原核表达和纯化

为获得纯度大于90%的M1蛋白,构建重组质粒PET-22b-M1,将正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测分析表达形式和表达量,并经Ni2+柱亲和层析与柱层析纯化表达蛋白。结果表明:试验成功构建了pET-22b-M1表达载体;IPTG诱导后高效表达出分子质量约为28 ku的M1融合蛋白;纯化的目的蛋白在SDS-PAGE图谱上呈单一条带,且获得的M1蛋白纯度达95.4%。     

分支杆菌DNA的不同提取方法在PCR反应中的定性评价

采用已报道过的分支杆菌DNA7种不同提取方法分别对标准BCG菌株和结核病鹿肺样本DNA提取后比较并进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过PCR反应对几种DNA提取方法做出定性评价。结果表明:方法5和7有100%临床样本检测率,方法7所得DNA浓度和纯度最高。说明临床样本分支杆菌DNA提取过程中使用物理和化学方法裂解细胞,使用蛋白酶K和氯仿纯化、异丙醇沉淀DNA是十分必要的。