江苏盐城某规模化猪场隐孢子虫感染现状调查

为了调查江苏盐城某猪场的隐孢子虫感染情况,采集300份仔猪新鲜粪样,提取基因组DNA,应用PCR方法对隐孢子虫18S rRNA和ITS序列进行扩增、克隆和序列分析。共检出41份阳性样品,阳性率为13.67%,克隆得到的序列大小分别为429 bp和532 bp。系统发育进化树分析显示,该猪场感染的隐孢子虫为鸵鸟隐孢子虫(Cryptosporidium struthioni)。猪感染鸵鸟隐孢子虫在我国尚属首次。本研究结果不仅丰富了我国猪隐孢子虫感染的流行病学资料,也为本地区隐孢子虫病的防控奠定了基础。     

鸡组织滴虫病PCR病原学诊断方法的建立

为建立鸡组织滴虫(H.meleagridis)的PCR检测方法,本研究以确诊的感染火鸡组织滴虫的阳性鸡的肝组织DNA为模板,设计针对18S rRNA基因高度保守的特异性引物,建立组织滴虫病的PCR诊断方法。敏感性试验显示阳性样品组织DNA的最低检出限为4 ng/μL。特异性试验表明与其他常见鸡寄生虫的DNA样品均无交叉反应。该PCR方法对临床样品的检出率为100%,与组织病理学诊断结果符合率为100%。该诊断方法敏感、特异,可以用于组织滴虫病的临床诊断。     

人工感染猫芮氏等孢球虫卵囊排出规律的观察

芮氏等孢球虫是引起猫球虫病的常见病原之一,可引起猫腹泻、呕吐、吸收障碍、体重减轻、免疫力低下等症状。鉴于目前对猫芮氏等孢球虫卵囊排出规律不甚了解,造成预防治疗效果不佳,本试验通过猫口服感染芮氏等孢球虫卵囊试验,监测了芮氏等孢球虫的排卵囊规律。结果显示,接种后d7在幼猫粪便中检出芮氏等孢球虫卵囊,d10猫粪便中卵囊数量达到一个小高峰,随后有所下降,d13排卵囊达到最高峰,随后卵囊排出数逐渐下降,d19粪检卵囊呈阴性,直至d23粪检卵囊仍然呈阴性。     

临床疑似病例中火鸡组织滴虫的检测及其在脏器分布规律

为了探明临床病鸡中火鸡组织滴虫的脏器分布规律,本研究收集21例临床疑似病鸡的321个组织器官,采用PCR技术对样品中的虫体DNA进行了检测。结果:组织脏器中肝脏和盲肠的阳性检出率最高,分别为57.1%和52.4%;其次为回肠、脾脏、肾脏、肌胃、胰腺和脑,阳性率分别为43.8%、40.0%、40.0%、37.5%、35.7%和33.3%;心、肺、法氏囊和其他肠道组织等检出率较低;胆囊未检测到。结论:火鸡组织滴虫主要感染肝脏和盲肠,其次为回肠、脾脏、肾脏、肌胃、胰腺和脑,其他脏器虫体分布较少。     

鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的克隆表达及其免疫保护力

为了研究鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的功能,以毒害艾美耳球虫(扬州株)第二代裂殖子的总RNA为模板,RT-PCR扩增其EnSAG,连接至pGEM-T-Easy载体,鉴定后构建pET28a(+)-EnSAG表达载体,转化至大肠杆菌BL21,鉴定后进行诱导表达和纯化。用纯化重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗EnSAG蛋白的多克隆抗体。利用多克隆抗体,用Western blot技术检测子孢子和第二代裂殖子中的天然EnSAG蛋白。用重组蛋白按高剂量(200μg/羽)、中剂量(100μg/羽)和低剂量(50μg/羽)免疫雏鸡,同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照,以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标,评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示：该基因全长768 bp,编码255个氨基酸,分子质量24.63 ku;重组蛋白大小约为30 ku,以包涵体形式为多,能被组氨酸单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别;在第二代裂殖子中检测到天然EnSAG蛋白,其分子质量大约为27 ku。各试验组的成活率均为100%;免疫组的平均增重增加,病变记分...