广西猫杯状病毒全基因组序列测定及其遗传进化分析

为了掌握广西猫杯状病毒(FCV)的流行情况及其变异规律。本研究于2018年3月至2019年9月采集疑似FCV鼻拭子59份,其中阳性检出率49.2%(29/59)。将阳性病料接种CRFK细胞,成功分离获得一株FCV毒株,命名为NN01-19。为深入了解其遗传进化规律和分子特征,本研究通过RT-PCR方法扩增获得该毒株的全基因组序列,并对其ORF2基因进行了遗传进化和序列分析。结果表明,NN01-19毒株基因组全长7709 bp,其中ORF2基因全长2010 bp。遗传进化分析发现该毒株与广西早期分离株GX01-13同属基因I群,但核苷酸和氨基酸同源性仅为77.9%和86.5%。其中,超变区(E区)抗原线性表位新增T448A、T450G、G451Q和T454S四个突变位点。重要的是,该区域还发生了V430T的突变,符合VS-FCV致病性氨基酸突变特点。本研究为深入了解FCV的流行特点及其变异规律提供了参考依据,同时也为今后防控FCV提供了重要的理论基础。     

4种猪腹泻病毒恒温隔绝式荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

为鉴别猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)这4种猪主要腹泻病毒,本研究分别针对PEDV M基因、TGEV M基因、PoRV NSP5基因、PDCoV M基因设计特异性引物和探针,经过方阵法优化恒温隔绝式荧光RT-PCR(iiRT-PCR)反应条件,建立了检测这4种猪腹泻病毒iiRT-PCR方法。用建立的iiRT-PCR方法分别检测PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本脑炎病毒(JEV),并对iiRT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,结果显示该方法特异性强,对PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV的检测下限分别为10²、10²、10³、10³ TCID₅₀/mL,并具有良好的组内和组间重复性;而荧光定量PCR方法的检测下限分别为10¹、10²、10²、10^2<...     

携带H1N1 pdm09基因的重配猪流感病毒分子流行特征研究进展

在2009年甲型H1N1流感(H1N1 pdm09)大流行暴发初期,该病毒就已经成功地潜入到了猪群当中,继而参与到了猪流感病毒(SIV)的进化过程,通过不断地重配和适应,促进了新型SIV变异毒株的产生.目前,世界各地的猪群中普遍流行着携带有H1N1 pdm09基因片段的新型SIV,其重配形式呈现多样化.值得一提的是,由...     

H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV多重PCR检测方法的建立及应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染肺泡巨噬细胞,严重损害免疫系统,导致与其他病毒共感染现象,其中猪流感病毒(SIV)也是病原之一。为了快速检测和区分PRRSV基因型与SIV亚型,本研究针对H1、H3亚型SIV的HA基因和美洲型、欧洲型PRRSV的N、M基因的保守序列,分别设计了4对特异性扩增引物,在引物浓度、退火温度等反应条件的系统优化下,分别对其特异性和敏感性进行验证,建立了能够快速检测以上4种病原的多重PCR方法,并对155份临床样品进行了检测。结果显示,该检测方法特异性好、灵敏度高,对H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV的最低检出量均低至9.86×10⁰ copies/μL。以单一PCR方法对所有临床样品进行检测后发现,检测结果与多重PCR检测结果一致,证明这种多重PCR方法可以用于这4种病毒的快速检测与分型鉴定。     

四株分离自同一猪场的H3N2亚型猪流感病毒的进化分析

猪作为流感病毒异源毒株间发生基因重组的"混合容器",其呼吸道上皮细胞上同时存在着能够感染人（SA α-2,6-Gal）和禽（SA α-2,3-Gal）两种流感病毒的受体,具备产生新型流感病毒的潜力。在我们的前期研究中,连续两年（2013年和2014年）从南宁地区某个规模化养猪场当中分离获得了2株新型甲型流感病毒重配的H3N2亚型猪流感病毒（swine influenza viruses,SIVs）。为了解SIVs在同一地方的遗传进化规律,我们在2018年至2019年间对该猪场进行了持续的监测,并于2019年再次成功分离获得了2株H3N2亚型的三源重组毒株,命名为A/swine/Guangxi/JG13/2019（简称JG13/2019）和A/swine/Guangxi/JG20/2019（简称JG20/2019）。遗传进化分析表明其基因重配形式与2013年分离株A/swine/Guangxi/JGB4/2013（简称JGB4/2013）和2014年分离株A/swine/Guangxi/JG1/2014（简称JG1/2014）相同,表面基因HA和NA来源于类人H3N2谱系,内部基因NP、M、PA、PB1和PB2来源于2009年甲型H1N1大流感谱系（pdm/09H1N1）,NS基因来源于古典型H1N1谱系。此外,新分离株JG13/2019和JG20/2019同早期分离株JGB4/2013和JG1/2014 HA和NA基因的核苷酸相似性分别为95.3%~97.4%和93.9%~97.0%,内部基因（NP、M、PA、PB1和PB2）的核苷酸相似性为96.2%~98.1%,NS基因的核苷酸相似性为97.1%~97.6%。通过分析比较这些年代不同毒株之间的关键氨基酸位点差异,结果发现JG20/2019和JG13/2019的HA蛋白仍旧保持了与人型受体结合的分子特征（190D、226I和228S）,却也出现了V223I或P227S的新变化,JG13/2019的PA蛋白（R356K）和PB2蛋白（I588T）也与之前的毒株有所不同。这些位点上的氨基酸改变是否影响到病毒的致病能力、复制能力以及跨种间传播能力,有待今后进一步研究。历经6年,携带有pdm/09 H1N1多种内部基因片段（PB2、PB1、PA、M、NP）和类人表面基因（HA和NA）的H3N2亚型SIVs依旧在同一个猪场的猪群中流行,虽然其关键的功能区域出现了基因突变,但是仍然保持着能够感染人的受体结合特性。因此,加强对SIVs流行情况的监测,将为今后防控人类流感大暴发提供预警。     

一例犬严重伤口感染病例的诊治

病犬临床表现为持续高烧、呕吐、食欲下降、精神沉郁,视诊发现右侧脖子有一个质地较硬的肿块,患处流脓伴有恶臭气味.通过临床检查、血常规、血液生化、犬CRP荧光定量检测、血涂片检查、影像学检查,初步诊断该病犬可能患有因伤口感染诱发的严重胰腺炎、败血症.对病犬进行清创、消炎、抗感染等治疗,再搭配犬血白蛋白和凝胶干细胞等药物辅助...     

犬流感的流行病学研究进展

近年来,不同宿主来源的流感病毒感染犬的病例报道使得犬成为流感病毒生态循环中的重要中间宿主。介于人与犬之间的亲密关系,其公共卫生意义越来越值得人们关注。本文从流感病毒由马—犬、禽—犬、猪—犬和人—犬等跨宿主传播方面阐述不同宿主流感病毒在犬中的流行现状及其重配现象,这对今后全面掌握其流行特征和切断其传播途径具有重要的借鉴和指导意义。     

一例犬剖腹产后引发子宫蓄脓并发膀胱粘连的病例报告

正在临床上,子宫蓄脓是一种常见的母犬的生殖系统类疾病~([1]),它主要危害的是成年未经产或者做过剖腹产的母犬。犬的子宫蓄脓通常表现为开放型和闭合型两种。开放型子宫蓄脓的犬的子宫颈口开放,其内的脓性液体不断流出,典型特征就是阴门处可见淡黄色或者乳白色的脓汁,母犬喜好回头舔食,腹围增大不明显。如若采取全身消炎、局部子宫灌注抗生素等保守治疗的办法,虽能取得     

猫杯状病毒、猫细小病毒、猫流感病毒和猫疱疹病毒多重PCR检测方法的建立和应用

为建立快速检测猫科动物重要传染病的多重PCR检测方法,根据GenBank中登录的猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)、猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)、猫流感病毒(feline influenza virus, FIV)和猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus type 1,FHV-1)的相对高保守性基因ORF2、NSP1、M和UL27,分别设计4对特异性引物。通过对反应体系的摸索及优化,建立了可同时扩增FCV(257 bp)、FPV(380 bp)、FIV(519 bp)和FHV-1(761 bp)的四重PCR反应条件及体系。结果显示：能够在同一体系中用同一反应扩增出以上4种病毒基因,其重复性及特异性均良好,敏感性可达到10 copies/μL。用该方法检测69份口鼻拭子,结果发现FCV和FPV混合感染的阳性率为10.14%,FCV和FHV-1混合感染的阳性率为1.45%,FCV、FPV和FIV混合感染的阳性率为10.14%。结果表明：研究建立的四重PCR检测方法可对常见猫科动物病毒性传染病进行快速准确的鉴别诊断,而且为...