不同β-胡萝卜素添加水平对荷斯坦种公牛精液品质和血清指标的影响

选取20头荷斯坦种公牛,单因子试验设计,随机分为4组,分别饲喂基础日粮（对照组）和β-胡萝卜素添加水平为25mg／kg、50mg／kg、100mg／kg的试验13粮（按日粮风干物质计）,试验期为6个月,观察不同β-胡萝卜素添加水平对种公牛精液品质和血清指标的影响。结果表明：①添加β-胡萝卜素可极显著地提高种公牛血清β-胡萝卜素含量（P〈0．01）,而血清和精清中睾酮的浓度随β-胡萝卜素添加水平的提高呈先上升后下降趋势。②日粮中添加50mg/kg β-胡萝卜素,种公牛的射精量和鲜精活力显著高于对照组（P〈0．05）,精液密度极显著高于对照组（P〈0．01）,但与100me／kg添加组间差异不显著（P〉0．05）;而冻后活力、畸形率和顶体完整率3项指标各组间均无显著差异（P〉0．05）。③不同β-胡萝卜素添加水平对荷斯坦种公牛血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）和总抗氧化能力（T-AOC）的影响极显著（P〈0．01）,而对血清过氧化氢酶（CAT）无显著影响（P〉0．05）。综合分析表明：种公牛日粮中β-胡萝卜素的适宜添加量为50mg／kg。     

中国荷斯坦牛TLR2基因遗传多态性的研究

以297头中国荷斯坦奶牛为研究对象,以TLR2(Toll like receptor 2)基因为目的基因,扩增目的片段,结合测序结果采用PCR-RFLP和CRS-RFLP技术方法来检测TLR2基因第2外显子的遗传多态性.结果发现:exon 2存在10098(T/G),10111(G/A)和11541(C/T)3个单核苷酸突变,其中11541位点的T/C突变为首次报道.分别选择EcoR V、HaeⅢ、DraⅠ等3种限制性内切酶检测其多态性.10098位点有3种基因型(AA,AB,BB),A、B等位基因频率分别为0.784 5,0.215 5;10111位点有2种基因型(CC,CD),C、D等位基因频率分别为0.985 8,0.014 2;11541位点有3种基因型(EE,EF,FF),E、F等位基因频率分别为0.099 3,0.900 7.10098位点T-G碱基突变导致天冬氨酸突变为谷氨酸(Asp63Glu),10111位点G-A碱基突变引起甘氨酸突变为丝氨酸(Gly68Ser).TLR2基因外显子2上的3个位点基因型在研究群体中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(p＞0.05).10098,10111,11541 3个位点的多态信息含量、杂合度、有效等位基因数分别为0.280 9/0.338 1/1.510 8,0.027 9/0.027 9/1.028 7和0.143 4/0.178 9/1.217 9.10098位点达到中度多态,其余2个位点处于低度多态.TLR2基因可作为候选遗传标记,进行深入研究.     

反向遗传技术在牛轮状病毒研究中的应用

本文综述了牛轮状病毒的生物学特性、反向遗传学系统的建立及其研究进展,并对反向遗传技术应用于牛轮状病毒进行展望。     

中国荷斯坦牛HSP70-1基因遗传多态性与其耐热性的关系分析

研究中国荷斯坦牛HSP70-1基因与奶牛耐热性之间的关系.根据NCBI登陆号为AY149618(19 526 bp)的HSP70-1基因序列设计9对引物分段扩增该基因全长,并用PCR-SSCP、PCR-RFLP和CRS-RFLP相结合的方法寻找中国荷斯坦牛HSP70-1基因编码区的多态位点,分析山东省3个现代化牛场产奶牛127头,并以直肠温度和红细胞钾离子浓度为荷斯坦牛的耐热指标,用SAS 软件最小二乘分析一般线性模型分析试验牛HSP70-1基因型与耐热指标的相关性.发现1 623 bp处发生G→A→C的复等位突变位点,2 409 bp处发生G→A的突变;χ2检验结果表明在试验牛群中两位点均未达到Hardy-Weinberg平衡;2409位点基因型与两个耐热指标相关性不显著(P＞0.05),1623位点基因型与热应激时期中国荷斯坦牛的直肠温度相关性显著(P＜0.05),GA基因型个体显著低于CC和GG基因型个体,GA基因型为耐热基因型.HSP70-1基因可用作中国荷斯坦牛选育耐热牛群的分子遗传标记.     

牛源金黄色葡萄球菌突变株的筛选、鉴定及其免疫原性的研究

 【目的】诱变牛源金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb),筛选、鉴定弱毒性突变株,并研究其在鼠上的免疫交叉保护性。【方法】牛源金黄色葡萄球菌山东分离株zfb,经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)化学诱变,经生长特性、回复突变、毒力检测、LD50、多种特征性酶检测、小鼠中免疫保护性等实验比较研究了突变株与亲本株的生物学特性,筛选得到遗传性状稳定β－溶血素缺失的弱毒性突变株。【结果】弱毒性突变株Hx与亲本株相比：其β－溶血性状完全缺失,生长缓慢,耐热核酸酶、血浆凝固酶等胞外蛋白的产量减少,在活体条件下可产生荚膜,半数致死量(LD50)10－1.83•mL-1远低下于亲本株的10－4.33•mL-1。亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死量是未接种过的6—50倍。非亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死率是未接种过的5—60倍。【结论】突变株Hx的β－溶血素缺失,毒性减弱,对金黄色葡萄球菌攻击具有较高免疫保护性。     

表达hTERT及SV40T永生化奶牛乳腺上皮细胞系的建立

构建pcDNA3.1-hTERT、pcDNA3.1-SV40 T载体,线性化后,共转染荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞,研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)和猿猴病毒40大T抗原(SV40 T)对荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞体外培养的作用,并对细胞进行RT-PCR检测分析及免疫荧光鉴定。结果表明,hTERT和SV40 T在奶牛乳腺上皮细胞中表达可以有效地延长细胞的体外培养时间,增加细胞传代次数,获得的细胞系可以正常表达角蛋白。说明在体外培养的乳腺细胞中共表达hTERT和SV40 T可以有效延长细胞寿命且不影响乳腺细胞特性。     

中国荷斯坦牛红毛基因变异及其编码蛋白结构预测

【目的】通过对中国荷斯坦牛MC1R基因的核苷酸序列分析和蛋白结构预测,探讨中国荷斯坦牛红白花毛色形成的分子机制。【方法】采用PCR-RFLP技术对MC1R基因进行分型,利用生物信息学方法对其蛋白结构特征进行模拟分析。【结果】检测出与毛色表型相关的三种基因型,EE基因型在中国荷斯坦黑白花牛中占优势,ee基因型在中国荷斯坦红白花牛中占优势。蛋白预测结果显示,ee基因型个体的缺失突变使蛋白质翻译提前终止,引发二级结构改变,导致中国荷斯坦牛红白花个体的出现。【结论】E等位基因主要与黑色毛色形成有关,e等位基因主要与红色毛色形成有关。     

口蹄疫病毒整合素受体研究进展

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)感染宿主细胞首先是病毒与被感染细胞表面的病毒受体结合,通过网格蛋白介导的内吞途径,酸化的内吞泡运输进入细胞内,然后衣壳迅速解体,释放出基因组RNA,细胞受体决定口蹄疫病毒宿主特异性和组织特异性.对口蹄疫病毒细胞受体的研究将有助于揭示口蹄疫病毒的感染机制、复制过程、致病机理和疫病预防及治疗等,细胞受体的研究已经成为目前口蹄疫病毒研究中的重点领域之一,论文就近年来FMDV整合素受体研究现状进行了综述,并对其发展进行了展望.     

金黄色葡萄球菌聚集因子A（C1fa A）功能区基因的克隆及真核表达质粒构建

粘附素蛋白是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子,研究根据金黄色葡萄球菌聚集因子A（c1fa A）基因,设计合成特异性引物,以国内奶牛乳腺炎临床分离株金黄色葡萄球菌基因组为PCR模板,进行c1fa A基因的克隆,并连接入pMD18-T载体进行测序和序列分析,然后经BamH I和Xba I双酶切后构建真核表达载体并进行鉴定。结果表明,以金黄色葡萄球菌标准株为对照,国内分离株多数在990bp处扩增到特异性条带,经测序鉴定,与Genebank发表的金黄色葡萄球菌c1fa A序列同源性为99％;构建的真核表达质粒通过PCR和双酶切鉴定证明构建成功,为研究核酸疫苗奠定基础。     

奶牛乳房炎疫苗的研究进展

乳房炎（Mastitis）是乳腺受到物理、化学刺激，尤其是微生物侵袭所发生的一种炎性变化，给奶牛养殖业造成了巨大的经济损失。引起奶牛乳房炎的常见致病菌有金黄色葡萄球菌属、链球菌属、大肠杆菌属等约140多种，当外界病原菌进入乳房，突破奶牛的免疫防御体系，定植，感染，就会形成乳房炎。