鹅副粘病毒病的研究进展

鹅副粘病毒病是近年来引起各种年龄鹅发病并致死的一种烈性传染病。目前，本病在我国许多省市流行，具有很高的发病率和死亡率。本文从临床症状、病理变化、病毒的组织嗜性、生物学特性和分子生物学性状等方面对鹅副粘病毒病作一综述。     

poly(I:C)刺激鸡胚胎成纤维细胞产生外泌体的抗新城疫病毒活性

外泌体(exosomes,Ex)是由各种细胞分泌的微小囊泡,可以通过传递RNA、DNA及蛋白质改变受体细胞状态。poly(I:C)是一种dsRNA模拟物,具有一定的抗病毒活性。为研究经poly(I:C)处理后鸡胚胎成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)来源Ex的抗新城疫病毒(NDV)活性,通过超速离心法分离得到CEF来源Ex,并通过透射电镜和免疫印迹试验(Western blot)对其进行鉴定,随后评估其抗NDV活性及活化靶细胞抗病毒能力。结果发现,poly(I:C)刺激使CEF Ex分泌量增加1倍,且poly(I:C)Ex表现出比PBS Ex更强的抗NDV作用。进一步研究表明,poly(I:C)刺激CEF产生的Ex可通过TLR3-NFκB途径产生抗NDV作用。     

新城疫、禽流感和禽腺病毒病三联嵌合型病毒样颗粒的构建及鉴定

采用新城疫病毒样颗粒载体平台和昆虫杆状病毒表达系统,将禽流感H9N2株HA、禽4型腺病毒Fiber2嵌合至新城疫病毒样颗粒载体表面进而构建“新流腺”三联嵌合型病毒样颗粒(ND-AI-FAdV4 cVLPs)。PCR及免疫荧光检测结果显示,成功构建了重组杆状病毒rBV-cFiber2;透射电镜结果显示,ND-AI-FAdV4 cVLPs直径约为100 nm、含有囊膜的空心蛋白颗粒;免疫印迹结果显示,嵌合型病毒样颗粒各组分蛋白均正确表达。本试验为新城疫、禽流感和禽腺病毒病的安全、高效病毒样颗粒新型疫苗候选株的应用奠定了基础。     

基因型鹅副粘病毒NA-1株全基因组的克隆及特性分析

将本实验室分离保存的NA-1株鹅副粘病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的GPMVZJ1株基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段,并将各目的基因片段回收纯化,克隆PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切鉴定并进行序列测定,对测定结果进行拼接得到全长cDNA序列(GenBank登录号:DQ659677)。NA-1株核苷酸比新城疫病毒(NDV)核苷酸多6个碱基,位于1644~1645nt之间,符合NDV核苷酸“六碱基原则”。序列分析结果表明,GPMVNA-1株与各地代表株核苷酸同源性81.2%~91.3%。同时根据各毒株F基因开放阅读框前389个核苷酸序列绘制出系统发育进化树,结果表明GPMNNA-1株与SF02和QY97病毒株同属于基因型,不同于基因IX型NDV的国家标准株F48E9和基因型的LaSota传统弱毒株。     

噬菌体展示技术及其应用研究进展

噬菌体展示技术（Phage Dlsplay techniques，PDT）起源于1985年，是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术，广泛应用于研究蛋白质的结构与功能，蛋白质间的识别与作用，分离体内特异蛋白质与基因以及实验进化等多个分子生物学领域。目前噬菌体展示技术的研究进展非常迅速，在抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节分子的分离和人工抗体和疫苗的制备、诊断技术、酶抑制剂的研究开发、多肽药物的研制等生物技术研究的不同领域得到了应用，并对这些领域产生了深远的影响。     

传染病诊断方法的验证

诊断敏感性和特异性是诊断方法验证过程中的两个重要参数。本文通过分析和比较,详细阐述了诊断敏感性和特异性在动物检疫工作中的重要性,厘清了其与分析敏感性和特异性的区别。通过计算分析比较了不同流行率对检测结果可信度的影响,以及在同一流行率下,诊断敏感性和特异性变化对检测结果可信度的影响。结果显示,当流行率低时,诊断特异性对结果可信度的影响更大,诊断特异性的降低会导致阳性检测结果可信度显著下降。因此在进出境动物检疫工作中,不要一味强调分析特性,而要重视诊断特性;既要关注诊断敏感性,做到不漏检;也要关注诊断特异性,做到不误检。     

鹅副粘病毒与鹅细小病毒主要免疫原性基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的共表达及其免疫

根据测得的鹅源副粘病毒（GPMV）NA-1株F基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的含F基因的质粒pGF为模板,PCR扩增F基因片段（去除终止密码子）,与转座载体pFastBac连接,构建重组质粒pFastBac-F,并进行测序鉴定;根据测得的鹅细小病毒（GPV）GD-01株VP3基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的重组质粒pGVP3为模板,PCR扩增出有Linker的VP3基因（命名为LVP3）。再将重组质粒pFastBac-F与LVP3片段连接,构建重组转座载体pFF-LVP3,转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得重组Bacmid F-L-VP3转染Sf9昆虫细胞,所表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,特异蛋白分子质量约123 000。将表达蛋白免疫雏鹅,经抗体测定证明,表达的F-VP3重组蛋白能诱导机体产生特异性免疫应答。     

鸭副黏病毒病的诊断与病毒分离鉴定

鸭副黏病毒(DPMV)属于副黏病毒科副黏病毒亚科腮腺炎病毒属禽1型副黏病毒(APMV-1)中的一员。近年研究表明,鸭副黏病毒的感染呈上升趋势,对我国的养鸭业产生巨大危害。本病没有明显的流行季节,一年四季均可发生,发生该病后,病鸭并非在短时间内大批死亡,而是不间断地陆续死亡,同     

鸡传染性法氏囊病免疫中应注意的几个问题

近几年来,辉南县种鸡场依靠科学饲养管理和现代防疫手段在防制鸡传染性法氏囊病(IBD)方面取得了成功的经验,但在实践中也发现了免疫中存在的几个问题。结合本场实际及国内外IBD发生状况,提出了应注意和澄清以下几方面问题,有助于今后IBD的免疫。1 IBD母源抗体的监测及免疫日龄的确定 该场虽是种鸡场,但又有不少商品蛋鸡、肉鸡,不同品种不同日龄及不同IBD免疫程序的鸡群同