维生素A-DHA酯的酶法合成及纯化制备

维生素A具有维持正常视力、改善皮肤、抗衰老等多种生理活性,但极不稳定,很容易在光、热、氧的作用下发生分解。选择二十二碳六烯酸乙酯(Ethyl docosahexaenoate, EDHE)与维生素A醋酸酯(Vitamin A acetate, VAAE)作为底物,在脂肪酶Novozyme435的催化下发生转酯反应,从而合成一种新型的维生素A-DHA酯(Vitamin A docosahexaenoate,VADHE)。利用液相及质谱对目的产物进行鉴定,在此基础上,利用硅胶柱层析(C18填料)对反应体系中的VADHE进行纯化。经液相色谱检测,VADHE的纯度达到90%以上。为了进一步提高目的化合物得率,分别在有机溶剂体系和无溶剂体系中对转酯反应进行了优化。在有机溶剂体系中,反应6 h转化率可达40.61%。在无溶剂体系中,用100 mg脂肪酶催化反应4 h,转化率可达56.39%。该研究首次设计并合成了新型脂质VADHE,实现了该物质的纯化制备,为后期的活性检测实验奠定了基础。     

类胡萝卜素对合浦珠母贝热休克蛋白基因HSP22表达的影响

虾青素具有多种生理活性,但在自然界中通常以不同脂肪酸结合的虾青素酯形式存在,将虾青素酯水解为游离虾青素是提高其吸收利用度和制备特定构型虾青素酯的重要研究方向。以浅紫色链霉菌 (Streptomyces violascens ATCC 27968) 来源的脂肪酶Sv-lip5为研究对象,将其在枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 中进行异源表达,分析其酶学性质并探究其在虾青素酯水解中的应用。结果显示,Sv-lip5的最适温度为45 ℃,最适pH为10.0 (Gly-NaOH缓冲液),在35~55 ℃条件下孵育21 h后仍有高于55.7%的酶活。Sv-lip5为耐碱性酶,在碱性条件下孵育48 h后相对酶活仍可保持在70%以上。Sv-lip5可有效水解雨生红球藻 (Haematococcus pluvialis) 油中的虾青素酯,以对硝基苯酚棕榈酸酯作为底物测定该酶的比活力为12.46 U·g⁻¹,水解虾青素酯的最佳反应条件为pH 8.0,乙醇与缓冲液体积比为1∶12,最佳加酶量和时间分别为900 mg和12 h。在5.5 mL反应体系中添加900 mg的酶粉后,1 h有明显水解效果,第12小时可达最高水解率 (98.27%),200 μg虾青素酯中游离虾青素产量为147.48 μg,实现了游离虾青素的高效生物水解制备。