响应面法同步优化褶牡蛎中蛋白和多糖提取工艺

于单因素试验基础上,以牡蛎蛋白和多糖提取率(Y1和Y2)为响应值,利用响应面法对牡蛎中蛋白和多糖提取工艺进行同步优化.试验结果表明,液料比(X1)、提取时间(X2)、提取温度(X3)及pH值(X4)4个因素对Y1和Y2均有显著影响.由响应面三维及等高线叠加图得到牡蛎蛋白和多糖提取率均高的最佳提取工艺参数:液料比33∶1,提取时间2.6h,提取温度40℃,pH值4.2.在此条件下,验证试验得到牡蛎蛋白提取率为21.15％,牡蛎多糖提取率为12.07％,与数学模型预测值非常接近.可见,响应面同步优化法对牡蛎蛋白和多糖提取条件进行同步优化合理可行.     

水貂阿留申病毒的微滴式数字PCR方法的建立及初步应用

为建立水貂阿留申病毒(AMDV)微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,本研究根据AMDV VP2基因的保守区设计特异性引物和探针,通过PCR扩增AMDV VP2基因并克隆至p MD19-T载体,构建重组质粒p MD19-T-AMDV,并经PCR和测序鉴定后利用该质粒标准品作为模板,通过各反应条件的优化,初步建立了检测AMDV的ddPCR方法。分别以AMDV、水貂肠炎细小病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒、水貂流感病毒基因组为模板,按照本研究建立的ddPCR方法检测,评估其特异性;将1.43×10⁷拷贝/μL～1.43×10⁰拷贝/μL的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR和文献中的荧光定量PCR (qPCR)检测,评估该方法的敏感性;分别以不同浓度的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR分别进行批内和批间重复性试验,以变异系数(CV)评估该方法的重复性。优化结果显示,该方法的最佳引物终浓度为400 nmol/L (1.2μL)、探针终浓度为200 nmol/L (0.6μL)、退火温度为60℃。特异性试验结果显示,该方法仅可检...     

鸡腺胃炎的发病原因及防控措施

<正>近几年,一种以鸡生长不良、消瘦、均匀度差、腺胃肿、腺胃粘膜溃疡、脱落、肌胃糜烂为主要特征的传染病——鸡腺胃炎成为了困扰养殖户的心病。鸡腺胃炎也叫鸡传染性腺胃炎,是一种以腺胃肿大为主要特征的的传染病。主要表现为病鸡精神沉郁,饮食减少,体重逐渐下降,发病中、后期病鸡极度消瘦、苍白,最后因衰竭而死。1流行特点鸡腺胃炎广泛发生于各品种的鸡群,肉鸡、     

市场鸡沙门氏菌分离鉴定及致病性研究

为了研究不同沙门氏菌对雏鸡致病性的强弱以及不同药物敏感性情况,本试验对送检的病料进行病原分离鉴定,同时进行1日龄雏鸡致病性试验和药物敏感性试验。结果表明,分离菌为3种不同沙门氏菌,3种菌株在同时间内导致雏鸡不同程度的死亡,其中鸡白痢标准菌株致病力强,死亡速度快;同时3种菌株均对丁胺卡那、林可霉素类抗生素药物敏感,对氧氟沙星耐药。本研究为临床诊断沙门氏菌导致的雏鸡症状提供了理论依据,同时为筛选沙门氏菌病有效药物提供参考。     

家禽通用型沙门氏菌和3种血清型沙门氏菌PCR检测方法的优化

为了提高通用型沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鸡白痢伤寒沙门氏菌聚合酶链式反应（PCR）检测的准确性和灵敏度,试验通过优化整个PCR程序的退火温度、引物浓度及循环数,确定通用型沙门氏菌和各血清型沙门氏菌PCR检测最佳反应条件及检出限。结果显示：通用型沙门氏菌最佳退火温度、引物浓度及循环数分别为52.4℃、0.4μM和25个循环;肠炎沙门氏菌为50.8℃、0.6μM和35个循环;基于glg C基因检测的鸡白痢伤寒沙门氏菌最佳退火温度、引物浓度及循环数分别为53.4℃、0.4μM和35个循环;而鸡白痢沙门氏菌ipaj优化后最佳退火温度、引物浓度及循环数分别为52.4℃、0.4μM和30个循环。程序优化后通用型沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鸡白痢伤寒沙门氏菌检测灵敏度大大提升,分别为43·fg/μL、4.3·pg/μL·和43·fg/μL,而鸡白痢沙门氏菌的检出限未有变化,仍为430·fg/μL。通用型沙门氏菌和3种血清型沙门氏菌PCR程序经过优化后,检出限降低,灵敏度增加,对于养殖场中饲料、环境及病料中沙门氏菌的及时检出具有重要意义。     

鸡毒支原体PCR检测方法的建立

目前临床上常见的支原体主要为鸡毒支原体（MG）和鸡滑液囊支原体（MS）。由于MG和MS经常发生混合感染，给临床诊断和治疗带来极大的困难。为了快速诊断MG，特别是致病性鸡毒支原体，本研究针对MG的pvpA基因设计特异性引物，通过优化反应条件，进行灵敏性试验、特异性试验和重复性试验，建立快速高效检测MG的PCR方法。结果表明，该检测技术具有较好的灵敏性、特异性强且CV<3%，具有很好的符合性。