大豆肌醇半乳糖苷合成酶基因GmGolS及非生物胁迫表达分析

[目的]本文探索了大豆肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)基因与非生物胁迫的关系.[方法]通过RT-PCR从大豆叶片cDNA中扩增编码GolS的基因GmGolS.生物信息学分析预测该基因及编码蛋白的理化性质.构建系统进化树分析GolS蛋白的亲缘进化关系.采用实时荧光定量PCR技术检测该基因在非生物胁迫下的表达模式.[结果]G...     

大豆转录因子GmDof1.5的克隆与非生物胁迫诱导表达

Dof转录因子在植物的生长发育和非生物胁迫响应中起重要的调控作用。利用RT-PCR技术从大豆中克隆了一个功能未知的Dof转录因子基因GmDof1.5,该基因位于大豆基因组15号染色体上,ORF全长540 bp,编码含有179个氨基酸的蛋白质,相对分子质量为20.15 ku,等电点为9.82。蛋白序列预测发现,GmDof1.5蛋白含有一个典型Zf-Dof结合域,且含有大量磷酸化位点。蛋白系统进化分析表明,大豆GmDof1.5与豆科植物鸡血藤SsDof4的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果显示,ABA、干旱、高盐、高温和低温胁迫均可不同程度地诱导GmDof1.5的表达,且GmDof1.5对高温胁迫的响应最为显著。     

大豆GmDof4和GmDof11基因的非生物胁迫诱导表达及启动子分析

Dof家族是典型的植物特异性锌指转录因子家族,在植物中可以对非生物胁迫产生应答.为初步研究大豆Dof家族主要转录因子编码基因GmDof4和GmDof11在大豆抗非生物胁迫过程中的作用及调控原理,本研究通过实时荧光定量PCR检测大豆幼苗中GmDof4和GmDof11基因在非生物胁迫下的表达情况,并使用PlantCARE在...     

大豆GmGolS基因的原核表达及抗旱性分析

肌醇半乳糖苷合成酶(galactinol synthase,简称GolS)是棉子糖系列寡糖(raffinose family oligosaccharides,简称RFOs)生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫的过程中发挥着重要作用。通过逆转录(RT)-PCR从大豆叶片cDNA中扩增得到编码肌醇半乳糖苷合成酶的基因GmGolS,再将GmGolS基因构建到原核表达载体pET28上,然后将载体导入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,对其进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalacto pyranoside,简称IPTG)诱导。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)结果表明,在诱导时间为3 h、IPTG浓度为0.1 mmol/L的条件下,可以获得大量重组蛋白,分子量约为40 ku。对表达GmGolS蛋白的大肠杆菌进行抗旱性分析的结果显示,GmGolS基因在大肠杆菌中的过表达降低了重组菌的生活力,使其对干旱胁迫更加敏...     

大豆异黄酮提取-测定优化体系的建立

利用超声波法提取大豆异黄酮,结合三波长紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量,对大豆异黄酮提取方法进行优化.结果获得的最优提取条件为:料液比1:20、乙醇浓度50%、提取时间30 min,提取2次;并用三波长法测定24个大豆品种异黄酮含量,发现品种间异黄酮含量有显著差异,其中吉林32和吉林35含量最高,分别达到了0.292%...     

大豆逆境诱导基因GmPRP的克隆与表达

通过对大豆吉林32未成熟胚表达谱的分析,利用RT-PCR技术从大豆中克隆了一个新的脯氨酸富集蛋白基因,命名为GmPRP。GmPRP的开放阅读框长396 bp, 其分子量13.79 kD,具有131个氨基酸残基,等电点8.96,其DNA序列无内含子。GmPRP蛋白序列N端含有一段信号肽,中间为脯氨酸富集区,C端为半胱氨酸富集区。该蛋白与四季豆和木豆的PRP同源性最高, 具有较近的亲缘关系。GmPRP的683 bp启动子序列含有10种与逆境相关的顺式作用元件,分别为ABRE-like、G-box、W-box、GT-1、MYB、MYC、BIHD10s、DPBF、SEBF和WRKY。实时荧光定量PCR分析表明, 该基因表达量在大豆的根和叶中最高,在茎和胚中其次,在花中最低,且受干旱、高盐、低温、机械伤害及SA(水杨酸)、ETH(乙烯)、ABA(脱落酸)、MeJA (茉莉酸甲酯)的诱导上调表达。     

东北地区大豆种质资源脂肪和蛋白质含量分析

利用近红外谷物分析仪对东北地区大豆品种(系)脂肪含量和蛋白质含量进行分析.结果表明:脂肪含量、蛋白质含量及蛋脂总量平均值不同年份间大致接近,三者中蛋白质含量具有更丰富的遗传多样性.不同地区间脂肪含量的分布规律:黑龙江省>吉林省>其它地区;蛋白质含量:其它地区>吉林省>黑龙江省;蛋脂总量:其它地区>吉林省>黑龙江省.早熟...     

大豆GmNCED1-2的非生物胁迫诱导表达及其转基因烟草鉴定

9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)是脱落酸(ABA)合成途径中的关键酶。本研究从大豆中克隆GmNCED1-2,其开放阅读框全长1 818 bp,编码605个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量6.693×10⁴,等电点8.00。GmNCED1-2蛋白含有1个RPE65超家族结构域、2个保守序列MIAHPKxDP和HDFAITE以及4个保守的组氨酸残基。GmNCED1-2蛋白的亚细胞定位预测结果显示其位于叶绿体中。蛋白质系统进化分析结果表明GmNCED1-2蛋白与CrNCED1蛋白和MhNCED3蛋白的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR结果表明GmNCED1-2在叶中的表达量最高。脱落酸、干旱、高盐、高温和低温胁迫下GmNCED1-2的表达量均升高。顺式作用元件预测分析结果表明GmNCED1-2启动子含有2个ABRE,3个ARE,1个TC-rich repeats和1个TGACG-motif顺式作用元件。将GmNCED1-2构建植物表达载体并转化烟草,获得3棵转基因烟草植株。烟草根长和生物量测定结果显示,GmNCED1-2的过表达抑制了转基因烟草根的伸长及植株的生...     

过量补硒对健康仔猪生长性能的影响

为了考察大量补硒对健康仔猪生长性能的影响,选择健康的大白、长白(34或35日龄)仔猪20头,分试验组和对照组,每组10头仔猪,平均体重10 kg。试验组仔猪按照2 mL/头、颈部皮下注射亚硒酸钠维生素E注射液,试验期25天。结果表明:试验组仔猪群体精神沉郁、不喜运动、喜趴卧、食欲锐减、黏膜发绀、部分仔猪有脱毛现象;对照组仔猪生长状况良好。试验最后1天试验组和对照组仔猪末重、日增重、日耗料均差异极显著(P0.01),试验组和对照组仔猪料肉比差异显著(P0.05)。因此,大量补硒后,会导致健康仔猪生长缓慢、饲料消耗增加、患病率升高、饲养成本增大,因此应严格控制健康仔猪的大量补硒。     

影响琼脂扩散试验因素分析

由于琼脂扩散试验操作简单、所用仪器少、结果容易判断,因此临床中常用于各种疾病诊断及抗体效价检测但是琼脂扩散试验容易受到多种因素的干扰而导致试验特异性、敏感性、精确性等受到影响,甚至出现无法判定结果的情况。就琼脂扩散试验的主要影响因素进行分析,为能给实验室技术人员做琼脂扩散试验时提供参考和帮助。