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旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10-3接种于密度为2×106 cells·mL-1的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5 μg·mL-1时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。 相似文献
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应用非洲绿猴肾细胞(Vero)从山东省诸城市疑似犬瘟热(canine distemper,CD)感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒。分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应(CPE),经毒力测定、血清学、RT-PCR检测及测序、回归动物试验证明为犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV),命名为CDV诸城分离株(CDV-ZC)。采用RT-PCR方法分段克隆分离株的全基因序列并测序,测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。结果表明,CDV-ZC株全基因(KJ994343)与标准美洲型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%~92.0%。血凝素(H)基因序列分析表明,CDV-ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子(SLAM)受体结合区即542~544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点(N-X-S/T)。致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,为CD的有效预防、诊断及控制提供理论依据。 相似文献
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猪是戊型肝炎病毒fHEVl的储存器,最近研究表明该病毒从猪到人跨物种传染。HEV大多通过未煮熟的肉或者内脏传播,本研究建立了一步RT—LAMP快速检测猪戊型肝炎病毒。设计ORF3基因特异性的引物,RT—LAMP的检测敏感性为101拷贝/txLRNA模板,比RT—nPCR检测方法敏感10倍。 相似文献
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试验研究了乙酰半胱氨酸(NAC)对脂多糖(LPS)多次刺激造成的免疫应激仔猪炎性介质的影响,旨在探讨NAC是否有缓解仔猪免疫应激的作用。选取来源一致、体重相近的18头健康仔猪[杜洛克×长白×大白,体重(11.58±0.26)kg],随机分成3个处理(对照组、LPS组和NAC组),每个处理6个重复,每个重复1头猪。对照组和LPS组饲喂基础日粮,试验组(NAC组)为基础日粮+500 mg/kg NAC,LPS组和NAC组仔猪分别于试验的第101、3、20 d腹膜注射100μg/kg BW的LPS,对照组注射等量的灭菌生理盐水。试验第10、20 d在注射LPS 3 h后前腔静脉采血,测定血浆TNF-α、CORI、L-6和PGE2含量。试验结果显示:日粮中添加NAC显著缓解了LPS刺激导致的血浆(第10 d)和血浆(第20 d)中TNF-α、CORI、L-6和PGE2含量的升高(P<0.05)。由此可见,在本试验条件下,LPS刺激引起仔猪血浆中炎性介质升高,日粮中添加500 mg/kg NAC缓解LPS导致的血浆中炎性介质的升高,缓解免疫应激,最终可能缓解LPS刺激引起的生长抑制。 相似文献
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