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将40只BALB/c小鼠随机分为2组,A组以VR1020免疫作为对照,B组以TS2l抗原基因的真核表达型质粒VTS2l免疫。用ELISA检测免疫小鼠IgG总量和特异性抗体水平,MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞伴刀豆蛋白A(ConA)刺激的增殖反应及IL—2的谤生活性,常规法检测外周血免疫细胞数量的动态变化。结果显示,VTS2l免疫小鼠血清的IgG含量和特异性抗体效价显著高于对照组小鼠;免疫小鼠脾淋巴细胞ConA刺激增殖反应和IL—2诱生活性均比对照组小鼠显著增强;免疫小鼠的淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞的数量也显著超过对照组。免疫小鼠的细胞和体液免疫反应显著增强,表明VTS2l具有很强的免疫激活作用,有进一步研制开发成为猪囊虫病DNA疫苗的潜力。 相似文献
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将猪囊尾蚴抗原基因TS11亚克隆至VRl020真核表达载体中,用菌落原位杂交法筛选重组质粒,将其转染COS7细胞,以Northern Blotting检测插入片段的转录;用ELISA检查其翻译表达产物。结果表明:VTS11在真核细胞中能够转录TS11基因的mRNA;其蛋白表达产物能为兔抗猪囊虫高免血清所识别,在转染真核细胞24h后,即可检测到正确表达的猪囊尾勘抗原蛋白。这些为深入研制猪囊虫的DNA疫苗奠定了可靠的基础。 相似文献
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[目的]研究厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin真核表达载体构建及表达。[方法]通过对前期所获得的厚壳贻贝多条mytilin和myticin抗菌肽基因进行筛选,选择其中5条厚壳贻贝抗菌肽基因,采用PCR技术和DNA重组技术构建了相关的真核表达载体,并采用LiAC转化法将其转化到S78酿酒酵母中并进行初步表达分析。[结果]5种厚壳贻贝抗菌肽基因的真核表达载体构建成功,对转化酵母进行mRNA检测结果表明,5种厚壳贻贝抗菌肽的基因在S78酵母中成功转录。[结论]该研究结果为最终采取基因工程手段表达厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin并在此基础上开展厚壳贻贝抗菌肽的后续研究奠定基础。 相似文献
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将克隆的梅山猪LH-β基因亚克隆到真核表达型载体VR1020上,通过质粒PCR的方法在转化子中筛选阳性克隆,用BamH I、BglⅡ双酶切鉴定重组子。得到的重组真核表达质粒转染Cos7细胞株,RT—PCR检测猪LH—β表达情况。然后用VPLH—β质粒、VR1020分别肌肉注射小鼠,研究了小鼠的生殖特性情况。结果显示:通过质粒PCR和双酶切分析,得到猪LH—p基因以正确方向插入的重组真核表达质粒VPLH—β。重组质粒VPLH—β经脂质体介导转染Cos7细胞,培养不同时间后提取mRNA进行RT—PCR,发现转染细胞RNA中含有与LH—β基因对应的mRNA;结果表明已成功构建了PLH—β的真核表达质粒,能正确转录表达LH—β。动物试验结果显示PLH—β免疫小鼠后的各项指标均高于对照处理。克隆构建的猪VPLH—β质粒能发挥明显的生殖生理调节作用,可较好地促进雌性动物的排卵、怀孕和正常产仔。 相似文献
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厚壳贻贝(Mytilus coruscus)是我国东部海域广泛分布的具有重大经济价值的水产养殖贝类,其血淋巴中含有多种抗菌肽分子。为了解厚壳贻贝血细胞和血清抗菌肽分子的组成特点,采用多维高效液相色谱对厚壳贻贝血清及血细胞的抗菌肽进行分离纯化,从中鉴定了多种具有抗菌活性的抗菌肽分子,质谱鉴定结合cDNA文库数据分析表明厚壳贻贝血细胞和血清的抗菌肽主要属于Mytilin和Myticin抗菌肽家族,分子量在3 000到7 000 Da之间,血细胞和血清抗菌肽在分子组成、抗菌谱方面均存在差异,此外还发现有分子量在10 000 Da左右的新型抗菌肽分子。以上工作为深入了解厚壳贻贝Mytilin抗菌肽的分子多样性、了解厚壳贻贝的免疫机制以及从中筛选具有开发价值的抗菌肽分子奠定了基础。 相似文献
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厚壳贻贝抗菌肽Mytilin的初步鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
厚壳贻贝是我国具有重大经济价值的水产养殖贝类,对其抗菌肽的研究有助于人们了解厚壳贻贝的免疫机制。为了解厚壳贻贝血清中抗菌肽Mytilin的分子组成和特性,采用多维高效液相色谱对厚壳贻贝血清进行分离纯化,从中获得3种对革兰氏阳性菌以及阴性菌均有抑制作用的抗菌肽分子,序列分析表明3种抗菌肽具有较高的序列相似性,均属于贻贝抗菌肽Mytilin家族,分别命名为Mytilin-1,Mytilin-2和Mytilin-3。其中,Mytilin-1为34个氨基酸残基构成的多肽,其分子量为3885.17u,含8个半胱氨酸,形成4对二硫键。根据所测Mytilin-1的氨基酸序列设计特异性引物,通过菌落PCR方法筛选厚壳贻贝cDNA文库,获得Mytilin-1的cDNA基因并进行了序列分析。以上研究结果表明,作为贻贝的主要抗菌肽家族,Mytilin在厚壳贻贝血清中具有较高丰度,对其蛋白质序列以及基因序列的研究为深入了解厚壳贻贝Mytilin抗菌肽的分子多样性奠定了基础。 相似文献
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本实验以猪带绦虫 TS11抗原基因的真核表达型质粒 VTS11肌肉免疫注射 BAL B/ c小鼠 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测小鼠脾淋巴细胞刀豆蛋白 A(Con A)刺激的增殖反应及 IL- 2的诱生活性 ;用 EL ISA方法检测免疫小鼠 Ig G总量和特异性抗体水平 ,常规法检测外周血免疫细胞数量的动态变化。结果显示 VTS11免疫小鼠血清的特异性抗体滴度和 Ig G含量显著高于空白对照组小鼠 ;免疫小鼠脾脏淋巴细胞 Con A刺激增殖反应和 IL - 2诱生活性均比对照组小鼠显著增强 ;VTS11免疫小鼠的淋巴细胞和巨噬细胞等免疫细胞的数量也显著超过对照组。这表明 VTS11免疫小鼠 ,可诱导其产生特异性的细胞和体液免疫反应 ,VTS11具有很强的免疫激活作用 ,可望成为预防猪囊虫病的一种新型疫苗。 相似文献
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CpG序列对副伤寒疫苗免疫小鼠应答反应的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
研究了CpG序列作为分子免疫增强剂,对常规副伤寒疫苗免疫小鼠后,小鼠体液和细胞免疫反应的变化情况。试验结果显示,CpG序列作为免疫增强剂,可以使免疫小鼠的总IgG含量、血清特异性抗体效价、淋巴细胞IL—2的诱生活性和脾淋巴细胞的增殖反应有明显的提高。结果表明,CpG序列能显著增强免疫动物对常规疫苗的免疫应答反应水平,可以作为提高疫苗免疫效果的有效途径。 相似文献