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选择柠檬酸三钠还原制备胶体金,制备的胶体金粒径为20~40 nm;利用胶体金来标记苯甲酸单克隆抗体,再将BA人工合成抗原(BA-BSA)和羊抗鼠二抗(IgG)分别包被在硝酸纤维素膜的T线和C线处,组装成胶体金免疫层析试纸条,快速检测水产品中苯甲酸。结果表明,单抗的最佳标记量为5.0μg/mL,最佳pH为9.0,复溶液为0.5%的Tween 20、pH为9.0的0.5 mol/L Tris;抗原的最佳包被量为7.0μL,二抗的最佳包被量为9.0μL,胶体金标记抗体量为5.0μL,胶体金免疫层析试纸条的目测检测限为1.0 mg/L。试验对苯甲酸试纸条的重复性、稳定性、假阳性及假阴性率的测试验证,结果良好。该试纸条对甲苯、苯乙酸、苯磺酸、苯丙氨酸等均不发生交叉反应性。将试纸条方法和高效液相色谱法做比较,结果显示试纸条和高效液相色谱法结果一致。制作的试纸条在检测水产品中苯甲酸的测试中是可靠的,检测准确且高效。 相似文献
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【目的】构建水产品中苯甲酸快速检测单克隆抗体。【方法】采用1,4-丁二醇二缩甘醚把半抗原和载体蛋白进行了偶联制备了免疫原;用戊二醛法制备了包被原,紫外光谱法对改造的抗原进行了初步鉴定,以BA-OVA为包被原,筛选出4株分泌抗BA抗体的杂交瘤细胞并通过动物免疫试验进一步验证;采用体内诱生法制备单抗腹水,并用辛酸-硫酸铵法和DEAE纤维素柱进行纯化;对获得的单克隆抗体进行亚型鉴定。【结果】建立间接ELISA和间接竞争ELISA法对血清多克隆抗体的效价和特异性进行了测定。经测定,单克隆抗体腹水效价为l∶5~20×l04,其中1株抗体(J5F4)对苯甲酸的IC50为225.3 ng/mL;同苯酚、苯甲醇的交叉反应率分别为9.57%和6.30%,得到的抗体特异性较好,可以应用于免疫学检测中。【结论】制作的改造抗原偶联是成功的,并且利用小鼠免疫方案具有很好的可行性,为下一步试纸条的生产打下了坚实的基础。 相似文献
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构建了一种有效的用于毛细管电泳测定鱼肉组织中的诺氟沙星和环丙沙星的基质固相分散萃取方法,分离诺氟沙星和环丙沙星的最佳条件为:60 cm×75μm的毛细管,pH 8.5、40 mmol-1的硼酸盐缓冲溶液,分离电压为16 kV,检测波长为280 nm。在测定之前通过使用预处理的C18的固相萃取步骤,并用3.0 mL乙腈洗脱化合物,对鱼肉组织样品中的诺氟沙星和环丙沙星进行纯化和富集。结果表明:诺氟沙星和环丙沙星的检测范围为0.10~500μg/g,其R2值分别为0.9994和0.9986,检测限分别为0.04μg/g和0.03μg/g。该方法已成功应用于鱼肉组织中诺氟沙星和环丙沙星的测定。 相似文献
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