新现猪Delta冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用

【目的】猪Delta冠状病毒（Porcine Deltacoronavirus, PDCoV）是近年来新发现的可引起猪只,特别是新生仔猪腹泻的冠状病毒,其引发的腹泻具有较高的发病率和死亡率,是造成新生仔猪死亡的重要原因之一。试验拟建立新现PDCoV RT-PCR检测方法,并调查当前江西腹泻猪群中PDCoV的感染情况。【方法】通过对GenBank数据库中PDCoV全基因组序列的比对分析,找出保守序列,用Primer 3.0在线软件设计1对扩增PDCoV核衣壳（N）蛋白基因片段的特异性引物,基于该引物建立PDCoV RT-PCR检测方法;用建立的方法检测腹泻猪粪便及肠道样品,挑选阳性扩增产物进行克隆、测序;用本试验获得的PDCoV序列与其他国家或地区的PDCoV序列以及猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）共同构建进化树,分析PDCoV各毒株及其与PEDV和TGEV之间的进化关系;以PEDV、TGEV、猪库布病毒（PKoV）、猪星状病毒（PAstV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）及猪瘟病毒（CSFV）RNA为模板验证引物的特异性;构建PDCoV核衣壳蛋白基因片段重组质粒,并以系列稀释的重组质粒为模板确定所建立的PDCoV RT-PCR方法的敏感性;应用建立的RT-PCR方法调查249份2012-2015年江西省猪群腹泻样品中PDCoV的存在情况,随机抽取一定数量的RT-PCR阳性扩增产物进行克隆、测序进一步验证反应的特异性。【结果】①以腹泻猪粪便样品RNA为模板,应用所设计的特异性引物扩增出了329 bp的单一条带,与预期目的片段大小一致,扩增产物经克隆后测序,将获得的序列与NCBI GenBank数据库序列进行比对,比对结果表明试验所获得的序列与数据库中PDCoV序列的同源性高达99.1%,证明所扩增的序列属于PDCoV;②将8条本试验获得的PDCoV N基因片段序列与18株其他国家或地区的PDCoV毒株以及PEDV、TGEV的相应N基因片段序列构建进化树,结果表明26条PDCoV序列属于同一个分支,而PEDV和TGEV则分别属于不同的分支。试验获得的PDCoV序列与韩国PDCoV毒株KNU14-04亲缘关系最近,同源性高达99.1%;与两株香港毒株HKU 15-44和HKU 15-155亲缘关系相对较远;③本试验建立的RT-PCR方法特异性强,仅能扩增出PDCoV,而对PEDV、TGEV、PKoV、PAstV、PRRSV及CSFV核酸无交叉扩增现象;④所建立的RT-PCR方法灵敏度高,将含扩增片段的重组质粒以1.0×10⁶拷贝/μL为起始浓度依次10倍稀释至1.0×10¹拷贝/μL作为模板验证方法的灵敏度,结果表明所建立的方法对PDCoV最低可检出量为1.0×10³拷贝/μL;⑤应用建立的RT-PCR方法检测了249份2012-2015年采集自江西省各地区的腹泻母猪粪便及腹泻仔猪粪便/肠道样本,结果显示腹泻样本中PDCoV的检出率为31.33%（78/249）,母猪粪便中PDCoV的检出率（27.78%）稍低于仔猪粪便及肠道样品PDCoV的检出率（31.92%）,最早可从2012年的样品中检测出PDCoV。【结论】试验成功建立了检测新现PDCoV的RT-PCR方法;应用所建立的RT-PCR方法检测了249份2012-2015年江西地区猪群临床腹泻样品中PDCoV存在情况,结果表明PDCoV是一种普遍存在于腹泻猪群中的病毒;研究建立的RT-PCR方法对猪群PDCoV的临床诊断和流行病学调查等具有应用价值。     

滇黄精总黄酮超声辅助双水相提取工艺优化及其抗氧化活性

以滇黄精为原料,采用Box-Behnken响应曲面设计对其总黄酮超声辅助双水相提取工艺条件进行优化,并研究滇黄精总黄酮对DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基的清除能力及小鼠肝组织脂质自氧化能力。结果表明,滇黄精总黄酮超声辅助双水相提取的最佳工艺条件为超声时间32 min、硫酸铵用量0.39 g/mL、液料比为24 mL∶1 g,此时获得的总黄酮提取率为6.21%;滇黄精总黄酮对DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基均有较强的清除能力,且能抑制小鼠肝组织脂质自氧化能力。     

热碱致魔芋胶与黄原胶共混凝胶的显微结构与流变规律

【目的】探究魔芋胶与黄原胶混合溶胶体系在碱性条件下的凝胶形成机理与凝胶特性,为魔芋胶与黄原胶相关凝胶食品的开发提供理论依据。【方法】在总多糖浓度约为2.0%的条件下,配制不同黄原胶与魔芋胶比例的混合溶胶体系,添加2.0%的Na₂CO₃,并于90℃条件下恒温处理各溶胶体系2 h,冷却至室温后制得不同黄原胶与魔芋胶配比的复合凝胶。通过测定复合凝胶添加碳酸钠前后的凝胶破裂强度,揭示热碱处理对混合凝胶破裂强度的影响。分别测定去离子水浸泡、2.0%柠檬酸溶液浸泡以及冻融处理后凝胶破裂强度的变化情况,并结合扫描电镜观测凝胶的微观形貌,探究复合凝胶的凝胶特性。此外,通过流变学手段进一步研究黄原胶与魔芋胶复合凝胶网络的形成机制。【结果】在室温（20℃）条件下,非热碱处理的魔芋胶与黄原胶最佳协同比为5﹕5,热碱处理后的魔芋胶与黄原胶最佳协同比增加至7﹕3,原因可能是魔芋胶碱化后分子链上脱去部分乙酰基,形成分子间三维网络结构,但在随后的冷却过程中,与黄原胶协同结合位点减少,因此在达到最大协同比时,需要更多数目的魔芋胶分子参与。此外,经去离子水和2.0%柠檬酸溶液浸泡后,所有凝胶体系的破裂强度都有所降低,其中经过2.0%柠檬酸溶液浸泡后的凝胶破裂强度下降更为明显。冻融处理后,复合凝胶均出现明显的析水现象,魔芋胶比例越高,析水现象越明显。进一步探究魔芋胶与黄原胶共混体系在2.0% Na₂CO₃浓度、90℃条件下的凝胶化过程,发现随黄原胶添加量增加,凝胶化速率呈减小趋势。此外,凝胶弹性模量在90—60℃呈降低趋势,60℃以下逐渐上升。【结论】在90℃条件下碱处理魔芋胶与黄原胶共混体系时,诱导体系形成热不可逆凝胶。当降低该体系的温度时,黄原胶分子在60℃时开始与魔芋胶网络结合,增加了凝胶的弹性模量。当魔芋胶与黄原胶比例为7﹕3时,室温下混合凝胶的破裂强度最大。经去离子水和2.0%柠檬酸溶液浸泡后,凝胶强度均有所降低。魔芋胶与黄原胶形成的复合凝胶在一定条件下可以改善单纯碱法诱导的魔芋胶凝胶析水多、强度差等缺点。     

履带车辆自适应预瞄跟踪模糊控制算法

针对现有单边制动履带车辆跟踪控制算法同周期内并行控制难、跟踪精度低、转向控制次数较多等问题,该研究以电控化改装后江苏筑水农机 3B55 型履带运输车为试验平台,开展单边制动履带车辆路径跟踪控制算法研究。通过单边制动履带车辆运动学分析,构建车辆预瞄跟踪模型,提出一种预瞄跟踪模糊控制算法,将横向偏差与航向偏差作为多输入输出模糊控制器输入参数,实现车辆同一控制周期内转向与直线行驶的并行控制。为了优化车辆路径跟踪精度与转向控制次数,提出改进麻雀搜索算法(sparrow search algorithm, SSA)的自适应前视距求解算法,考虑车辆的横向偏差和转向路径角度约束,解析较优前视距离,通过仿真和田间试验对算法进行跟踪精度与转向控制次数综合评价。仿真结果表明：基于自适应预瞄跟踪模糊控制算法跟踪多角度规划路径时,车辆转向控制次数为89次,误差面积为1.74 m²。田间作业路况下,由于试验路面起伏不平,并且随速度增加车辆跟踪精度下降,但跟踪精度及转向控制次数随前视距离的变化规律与仿真结果一致,当车辆分别以0.14、0.47和0.83 m/s跟踪路径时,自适应预瞄跟踪模糊控制算法相对于固定前视距离预瞄跟踪模糊控制算法车辆转向控制次数分别减少13.59%、9.87%和11.25%,误差面积分别减少19.93%、48.48%和54.59%,验证了算法的有效性。研究结果可为单边制动履带车辆的农机自动导航技术提供创新思路与技术支撑。     

基于岩心图像压缩的编辑器设计

岩心图像数据量很大,不便存储和传输,需要进行压缩。岩心图像编辑器采用标准的JPEG压缩方法,需要对编辑器进行设计。编辑器结构分为编码过程和解码过程,其功能包括FDCT(正向离散余弦变换)和IDCT(DCT逆变换)、量化和反量化、DC编解码和AC系数排序、熵编码和熵解码。可实现岩心图像的无损压缩。     

HACCP在初榨橄榄油生产中的应用

1前言橄榄油(olive oil)是用适当的机械方法从油橄榄鲜果中提取出来的油脂,其脂肪酸比例合适,含有多种维生素及多种微量元素等天然营养物质,此外含有在人体中具有一定生理活性功能的游离醇和酚类抗氧化剂等,有独特芳香和美味,饮食上具有独特的烹饪特点,其被人体吸收率达93.4%,对人体具有多种保健功     

母兔产仔与仔兔育成笼的设计和使用技术

母兔产仔与仔兔育成笼设4层,每层饲养1只产仔母兔和其所产的全窝仔兔（约6-8只）。每层笼由前网片、后网片、顶网片、侧网片和隔网片构成。     

解决鱼用饲草淡季的间作栽培技术

目前种草养鱼．种植的品种主要有苏丹草和黑麦草。由于这两个草种在大部分地区都已连作多年，又忽视选育，造成了草种品质退化，鲜草产量下降，抽穗期提前。出现养鱼饲草初夏(5—6月)秋来(9—10月)两个对期严重缺草。如果合理地间作套种鱼用青饲料，既可降低养鱼成本，提高鲜草产量，又能解决淡季无草的矛盾。     

晚播小麦高产栽培技术

通过以往对晚播小麦高产栽培措施的探讨,根据晚播小麦的生育特点,总结出了选用良种,以种补晚;适量播种,以密补晚;提高整地播种质量,以好补晚;科学施肥,以肥补晚;科学管理,促壮苗多成穗;沟系配套,以管促苗;防治病虫,以药保苗等迟播小麦高产栽培技术要点。     

主要粮食品种的价格走势将有所区别

(一)小麦价格继续有所下跌。由于夏粮可望获得丰收,小麦登场在即,而且国家未对小麦实施最低收购价政策,所以价格可能会继续有所下降。(二)晚稻(米)价格相对坚挺,稳中回升。国内稻米产量去年虽有所增加,但当年仍有100亿公斤的产需缺口,而且库存结构和地区布局不合理,绝大部分的粳米商品粮又集中在东北三省,受运输瓶颈制约大;国家最近公布的稻谷最低收购价维持在去年水平;随着库存的不断消耗、储备粮轮换出库频率的降低以及中央储备粮补库的逐步进行,加上当前东北晚稻谷价格居高不下,预计后期价格将稳中回升。(三)玉米价格低位徘徊。近期受主…