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扩展青霉基因组DNA五种提取方法比较 总被引:1,自引:0,他引:1
为寻找一种适合于扩展青霉基因组DNA的提取方法,比较了固体培养、液体静置培养和液体振荡培养3种培养方式的提取效果,分别采用氯化苄法、蜗牛酶法、CTAB法、SDS法及异硫氰酸胍法提取扩展青霉菌基因组DNA,经DNA质量浓度测定及电泳分析,比较5种方法的差异,并利用扩展青霉的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase)基因内一段保守序列,设计PCR引物,扩增大小为288 bp的特异目的基因,检测其灵敏性.结果表明:固体培养的方式较适合扩展青霉基因组DNA的提取,另外5种提取方法均能提取出扩展青霉菌基因组DNA,扩增出目的条带,其中氯化苄法和蜗牛酶法所提DNA的纯度均较好,但蜗牛酶法所提DNA量较少.因此,氯化苄法是5种提取方法中最可靠的DNA提取方法,所提DNA浓度高、纯度好、结果稳定,可作为PCR反应的模板进行特异性扩增,且该方法的最低检测限大约为1.01×10-1μg/mL. 相似文献
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细菌耐药性与畜牧产业发展、人类公共卫生安全和食品安全密切相关。细菌产生耐药的机制复杂,除由人-动物-环境三者之间复杂作用引起外,抗生素的使用对细菌耐药性的产生和传播具有非常重要的影响,需要采取多种策略应对细菌耐药性的产生。新发展的药物理论及分子生物学等技术的兴起,极大地推动了对细菌耐药机制的认识、新型抗菌药物的发现及药物的合理使用,为控制细菌耐药性的产生提供了重要的理论依据和技术手段。当前,细菌耐药性已然是不可忽视的严重问题,引起了多方关注。细菌耐药机制的复杂性及新药研发的困难性,决定了必须通过多种方法、多种途径和多种角度开展研究,从而控制其进一步发展。基于目前的研究现状,笔者归纳总结了多种应对细菌耐药的策略及方法,重点从新型抗菌药的研发、联合用药、药代动力学-药效动力学同步模型及多组学技术等方面阐述其在应对细菌耐药性方面的作用,以期为减缓和控制细菌耐药性的产生及临床治疗细菌感染提供参考和指导。 相似文献
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[目的]研究不同激素对普陀水仙生理生化指标的影响。[方法]以普陀水仙为材料,在以清水为对照的基础上,分别研究6-BA和2,4-D 2种激素胁迫对其茎、叶生理生化指标的影响。[结果]在一定范围内,随着6-BA和2,4-D浓度的增大,普陀水仙叶中的SOD活性逐渐增大,POD活性逐渐减小,而茎中的SOD活性逐渐减小,POD活性逐渐增大;随6-BA和2,4-D浓度的增大,茎、叶中可溶性蛋白含量和MDA含量的变化则呈波动曲线变化;茎、叶中脯氨酸含量随激素浓度的增加先增高后降低,当激素浓度为3 mg/L时达最大值;在6-BA和2,4-D的胁迫下,普陀水仙叶片电导率均呈增高趋势,茎电导率在6-BA胁迫下随激素浓度的增大而增大,在2,4-D胁迫下随激素浓度的增大而减小。[结论]根据试验结果,建议在进行普陀水仙大规模生产时,使用低浓度的6-BA和2,4-D。 相似文献
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旨在阐明贵州某规模化鸭场临床疑似鸭霍乱的病原菌耐药性及毒力特征,通过细菌的分离鉴定、多位点序列分型(MLST)、ERIC-PCR同源性分析、药敏试验、动物回归试验、细菌全基因组测序以及基因组局部比较分析对分离株进行系统研究。结果显示,分离得到5株鸭源多杀性巴氏杆菌(PmCW1~5),均为A:L1 ST128型且同源性较高;分离株均对氨苄西林、阿莫西林、左氧氟沙星和林可霉素4种药物耐药,其中PmCW1还对环丙沙星低水平耐药;对强毒株PmCW1的全基因组数据分析显示,PmCW1中存在β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和多肽类等耐药基因,同时存在多药外排泵及多药耐药蛋白基因,耐药表型与耐药基因检测结果基本相符;PmCW1中存在的毒力基因总数为201个,主要是脂寡糖/脂多糖(LOS/LPS)、荚膜、黏附因子等编码基因;此外,还检测到IV型菌毛基因(ptfA、comE、hofB、hofC、vfr)、铁摄取相关蛋白基因(ccmABCEF、hgbBC、fur、hscB等)以及部分外膜蛋白基因(ompP5等)等;PmCW1具有典型的A:L1型多杀性巴氏杆菌的特征。综上表明,本研究分离得到的ST128型鸭源多杀性巴氏杆菌目前鲜有报道,对其耐药性及毒力的研究可为鸭霍乱的临床用药及疫苗研发提供理论依据。 相似文献
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随着人们生活水平的提高及保健意识的增强,对无公害农产品的需求量增加.在猪生产中,使用西药防病治病,导致多重超强耐药菌株出现和抗生素在动物机体中残留,严重影响畜产品的出口和人类的身体健康.中草药饲料添加剂具有安全范围广、不易产生耐药性、药物残留低、毒副作用小等优点,因而在畜牧生产中被广泛应用. 相似文献
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为研究丁香酚对罗非鱼的麻醉效果,用体长(27.00±0.05)cm的罗非鱼进行了麻醉试验。结果显示,在水温25~27℃条件下,当丁香酚浓度在20~200 mg/L时,麻醉所需的时间与麻醉剂浓度呈负相关,而复苏时间与麻醉剂浓度呈正相关;在丁香酚浓度为50 mg/L的药液中药浴20 min,罗非鱼复苏所需的时间为3~4 min,在理想的复苏时间范围内;但随着药浴时间的延长,以及在空气中暴露时间的延长,深度麻醉的罗非鱼复苏所需的时间增加,且复苏率降低。试验结果表明,丁香酚是安全、有效的罗非鱼麻醉剂,其浓度在50~100 mg/L时,麻醉效果最佳,罗非鱼1~2 min即进入麻醉状态,麻醉后的罗非鱼3~4min复苏,可满足常规实验操作的需要。 相似文献
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【目的】调查广东地区畜禽源大肠杆菌的耐药特征与流行情况,为动物源大肠杆菌耐药性防控提供参考。【方法】对2019年从广东地区10个不同生产用途养殖场采集饲料、饮水和健康动物的肛/泄殖腔拭子等样品进行大肠杆菌分离鉴定、药敏试验、耐药基因和插入序列共同区(insertion sequence common region, ISCR)检测及种族系统进化分析。【结果】共分离获得416株大肠杆菌,其中种猪源78株、肉猪源77株、蛋鸡源122株、肉鸡源139株。菌株呈现多重耐药特点,不同动物源大肠杆菌中,肉鸡源大肠杆菌耐药率最高。79.6%(331/416)的菌株对3种或3种以上药物产生耐药,最多可对13种药物耐药,共组成156种耐药图谱,耐药谱以复方新诺明/氟苯尼考/多西环素/阿莫西林/氨苄西林居多,占比为11.1%。耐药基因以floR基因检出率最高,为50.0%;其次是sul2和sul3基因,检出率分别为44.2%和42.5%。与替加环素、黏菌素耐药表型相关的耐药基因tet(X3)、tet(X4)和mcr-1检出率均低于10%。插入序列共同区ISCR1、ISCR2和ISCR3的检出率分别为14.... 相似文献
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【目的】探讨鸡蛋蛋液、蛋清和蛋黄中兽药残留的快速分析方法。【方法】以磺胺二甲基嘧啶为
例,建立蛋液、蛋黄和蛋清样品中磺胺二甲基嘧啶的快速检测方法。样品的前处理采用液 - 液萃取技术快速实
现目标化合物的提取与净化,目标化合物采用选择性好和灵敏度高的高效液相色谱 - 电喷雾 - 串联质谱进行
检测。【结果】经基质加标实验验证,该方法稳定可靠。蛋液、蛋黄和蛋清中目标化合物的添加回收率分别为
78.4%~85.2%、77.9%~89.0%、83.0%~88.1%,方法检测限均为 0.5 ng/g。采用该方法对广州市 15 例鸡蛋样品进
行分析,结果显示,仅 1 例鸡蛋样品中检测到磺胺二甲基嘧啶,在蛋液、蛋黄和蛋清的含量分别为 0.66、0.94、
0.47 ng/g。【结论】该方法的样品前处理不需要过柱,操作简洁、耗材低廉、方法灵敏度高,且该方法具有良
好的加标回收率和较好重复性,适合大批量蛋液、蛋黄与蛋清样品中磺胺二甲基嘧啶的快速检测。 相似文献
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