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为了解泛素羧基端水解酶5基因(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L5, UCHL5)在脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)卵巢发育中的作用,本研究采用RACE技术克隆了脊尾白虾UCHL5全长cDNA,并对其在脊尾白虾不同组织和不同卵巢发育时期的表达情况进行分析,在此基础上构建了pET32a-UCHL5原核表达载体,进行诱导表达研究。结果显示,UCHL5 cDNA全长为1440 bp,共编码329个氨基酸,预测其相对分子量为37.57 kDa,理论等电点为5.51。系统进化分析表明,脊尾白虾UCHL5氨基酸序列与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)同源性最高(83%),与同为甲壳纲的凡纳滨对虾、拟穴青蟹(Scylla paramamosain)和三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)聚为一支。荧光定量PCR分析结果显示,UCHL5在鳃中的表达量最高,其次是卵巢,且在以上 2种组织中的表达量均显著高于其他组织;在卵巢不同发育时期,UCHL5的表达呈先上升后下降的趋势,在产后恢复期(Ⅴ期)急剧下降至最低水平。构建的UCHL5原核表达载体在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功表达UCHL5融合蛋白。本研究结果表明,UCHL5可能与脊尾白虾卵巢发育有密切关系,为研究甲壳动物卵巢发育的分子调控机制提供了理论基础。 相似文献
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本文建立检测黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco肌肉中叶黄素含量的反相超高效液相色谱分析方法。样品经95%乙醇提取,ACQUITY UPLC BEH C_18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm)分离,以89%甲醇-1%乙腈-10%水为流动相等度洗脱,二极管阵列检测器检测,检测波长446nm,外标法定量。结果显示:叶黄素在0.04~0.8μg·mL~(-1)范围内线性良好,此方法检出时限0.03mg·kg~(-1)。添加量在0.5mg·kg~(-1)、1.0mg·kg~(-1)、5.0mg·kg~(-1)时,叶黄素的回收率为82.0%~84.2%,相对标准偏差在10%范围内。结果表明:该方法可用于黄颡鱼中叶黄素成分的定性和定量检测。 相似文献
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脊尾白虾是我国重要的经济虾类,细胞周期蛋白C(CCNC)是细胞周期蛋白家族的一员,在细胞周期调控及转录调控等方面发挥着重要作用。为研究脊尾白虾CCNC(EcCCNC)基因在卵巢及幼体发育中的生物学功能,采用RACE技术克隆EcCCNC基因cDNA全长序列,实时荧光定量PCR技术研究EcCCNC基因在脊尾白虾不同组织、卵巢不同时期和幼体发育不同时期的相对表达量,并通过原核表达获得EcCCNC基因的体外重组蛋白。结果显示:EcCCNC基因cDNA全长1042 bp,包括82 bp的5′非编码区,156 bp的3′非编码区,804 bp的开放阅读框,编码267个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为31.34 ku,理论等电点为5.50;聚类分析表明,脊尾白虾EcCCNC基因编码的氨基酸与凡纳滨对虾的聚为一支,氨基酸序列与凡纳滨对虾的相似性(92%)最高;EcCCNC基因在卵巢中特别是大生长期及溞状幼体Ⅱ期的相对表达量最高(P<0.05);EcCCNC基因的体外重组蛋白为45 ku,经WB验证含His标签。研究结果表明,EcCCNC基因在脊尾白虾卵巢及幼体发育过程中很可能扮演了十分重要的角色。... 相似文献
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施玉芹;王权东;戴琴;吴建宁 《农机具之友》2013,(8):50-51
<正>为合理确定优化大白菜施氮量,我们在县土肥站的指导下,根据蔬菜品种,通常栽培方式,产量水平,养分吸收特点和土壤养分状况,在我镇新南村进行大白菜氮肥总量控制肥效试验,现作如下试验小结。1试验设计本试验在不断优化蔬菜氮肥适宜用量,设置了氮肥总量控制试验,设置5个处理:即无氮区、常规施肥区、优化施氮区、70%的优化施氮区、130%的优化施氮区。试验重复3次,小区随机排列。试验小区田块土壤为沙壤土,土壤肥力中等,是我地区蔬菜种植的典型田块,前茬种植品种为小白菜。2011年冬季收获后至 相似文献
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为探究strawberry Notch1基因(SBNO1)在甲壳动物中的免疫功能,本文对脊尾白虾SBNO1的cDNA序列全长、系统进化、组织分布以及副溶血弧菌感染后SBNO1和Notch信号通路中相关基因表征进行了研究。结果显示,脊尾白虾SBNO1 cDNA序列全长4353 bp,共编码1380个氨基酸,预测相对分子量158.91 kDa,理论等电点4.81。qPCR分析显示,脊尾白虾SBNO1在各组织中均有表达,其中在肝胰腺里表达量最高,性腺次之。利用RNAi干扰SBNO1显示,脊尾白虾在感染副溶血弧菌后,干扰组死亡率显著高于未干扰组。副溶血弧菌感染脊尾白虾后显著影响了Notch信号通路中SBNO1、Numb与Delta在肝胰腺中的转录情况,而Jagged表达差异不显著。SBNO1和Numb的表达量随时间变化都呈现出先上升后下降的趋势,Delta的表达量呈现出先下降后上升的趋势。结果表明,Notch信号通路参与了脊尾白虾副溶血弧菌感染后的免疫。本研究有助于阐明无脊椎动物先天免疫的机制,为抗病脊尾白虾的分子育种提供理论依据。 相似文献