碳离子束诱变选育高产角鲨烯类酵母及电转化初探

为进一步提高角鲨烯产量,以海洋产角鲨烯类酵母(Pseudozyma sp.) SD301为出发菌株,采用碳离子(¹²C⁶⁺)束诱变技术选育高产角鲨烯的突变菌株,并对突变菌株的电转化条件进行优化。利用100μmol·L^-1过氧化氢(H₂O₂)作为筛选压力,在12C6+束辐照剂量为120 Gy时,获得了比出发菌株具有更高角鲨烯产量的突变株PS120,该突变株在培养3 d后,角鲨烯产量达到1.33 g·L^-1,角鲨烯质量(细胞质量)达到41.31 mg·g^-1。利用绿色荧光蛋白EGFP作为表征标记,对PS120进行电转化条件优化,酶切、电泳和测序研究结果表明900 V电压条件下可成功将编码EGFP的基因转入到PS120细胞中,通过激光共聚焦显微镜进一步证实EGFP蛋白在该细胞中高水平表达。