黄鳝atrogin-1蛋白表达及细胞定位研究

为提高黄鳝养殖效率以及肌肉的质量,进一步发掘黄鳝肌肉发育相关基因,以atrogin-1为研究对象,构建了3种原核表达载体:pCold-TF-atrogin-1、pET28a (+)-atrogin-1及pGEX6P-1-atrogin-1。将构建的重组表达载体转入Transetta(DE3)感受态细胞,重组菌株经诱导表达后,仅pCold-TF-atrogin-1/Transetta(DE3)菌株表达出可溶性较高的重组蛋白。IPTG诱导试验结果表明,诱导剂浓度对蛋白质表达可溶性及含量几乎没有影响,诱导时间在20 h最佳。可溶性部分经Ni-NTA柱亲和层析纯化以及SDS-PAGE(10%聚丙烯酰胺)电泳,证实获得了重组蛋白。构建真核表达载体pEGFP-N1-atrogin-1,转染293T细胞,结果表明,atrogin-1融合蛋白在细胞质及细胞核中均有表达,且在细胞核中表达量相对较高。     

不同抗凝剂对黄鳝外周血抗凝效果的比较研究

为探讨黄鳝(Monopterus albus)血液适宜抗凝剂种类和最佳使用浓度,实验比较了6种常用抗凝剂对黄鳝外周血的抗凝效果及DNA质量的影响。结果显示:ACD、EDTA、肝素、草酸钾、草酸盐和柠檬酸钠的最佳抗凝终浓度分别为0.10×、0.50‰、0.016‰、0.63‰、0.025×和8.00‰,以上浓度能有效抑制凝血,且血细胞死亡率最低。最佳抗凝浓度下的短暂处理对血细胞DNA的质量无明显影响,但随着处理时间的延长,抽提获得的DNA含量均出现了不同程度的下降,含有ACD和EDTA的血液中DNA的含量下降最多,其次是草酸盐、草酸钾和柠檬酸钠,而加入了肝素的血液中DNA的稳定性最高,其含量无显著下降。