禽流感发生的流行病

今年以来，国外高致病性禽流感疫情呈明显扩大态势，特别是进入秋冬季以后，候鸟向南迁徙，家禽调运频繁，极易造成疫情传人和爆发。禽流感虽然没有像2003年的SARS疫情那样明显地影响和改变我们的生活，但接连由动物引发的威胁到人类健康甚至生存的疫情，还是让人产生很多的联想和思索。微生物远在人类出现之前就存在于这个星球上了，也将伴随着人类生命的进化而进化，或许它在人类生命消失之后还会存在于这个星球。而由于微生物对环境的适应力极强，它不会像动物或者植物那样出现某个种类的灭绝，科学的发展，也只能是尽力控制病毒。流感病毒也是如此。禽流感的发生和流行有其必然的因素。今年导致禽流感流行传染的原因除了周边国家发生禽流感以外，主要如下：对禽粪检疫力度不够或缺少主动监测；候鸟迂徙导致疫情蔓延；人畜禽间保持密切接触等。农业部对全国部分地区发生的禽流感疫情高度重视，特别派国家动物流行病学研究中心专家赴疫区，协助开展流行病学调查和疫情追踪工作。总结禽流感的发生与流行，希望能对禽流感的防制提供参考。     

爆发高致病禽流感疫区的自主活动鸟类禽流感及新城疫的血清学调查与分析

应用血凝抑制试验(HI),对采自健康的鹰、鸽子、野鸭和鹌鹑中的54份血清血清学检测,分析结果显示,在总共采集的54份血清样品中,抗新城疫病毒(NDV)抗体流行血清型(seroprevalence)与抗H6亚型禽流感病毒(H6)抗体、抗H9亚型禽流感病毒(H9)、抗H5亚型禽流感病毒(H5)抗体阳性率分别为64.8%、75.9%、29.6%。而根据血凝抑制试验检测结果发现,H5亚型禽流感病毒抗体滴度较低,最高仅为320,其阳性率为29.6%,推断其可能为新近传入的病毒或新近重组变异出现的新病毒,可能为与该次流感爆发相关的新病毒,这一推断还有待于通过对病毒基因序列的分析而做进一步验证;新城疫病毒在该生态系中的稳定循环,构成了对家禽潜在的威胁,我国目前非典型新城疫的一个主要原因是带毒鸟类的传入。     

猪捷申病毒TaqMan实时定量RT-PCR方法的建立

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5′端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法.应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒以及猪瘟病毒进行特异性试验,结果除PTV为阳性外其它均为阴性;针对PTV最低可检测到10个拷贝;批内、批间重复试验的变异系数均小于3％.应用建立的方法与病毒分离方法分别对91份临床样品进行检测,检出率分别为79.12％和57.14％,两者的符合率是78.02％.经临床应用表明,该实时定量RT-PCR方法可为PTV的早期诊断及定量分析提供技术手段.     

犬细小病毒高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用

为建立灵敏、快速的犬细小病毒(CPV)检测方法,本研究针对CPVVP2基因保守序列设计一对能扩增574bp片段的特异性引物,对纳米PCR的退火温度、引物浓度等反应条件进行了优化,并对其特异性和灵敏度进行了评估。结果表明,所建立的纳米PCR特异性和灵敏性良好,最低核酸检出量为2拷贝·μL^-1,其敏感性比常规PCR高1000倍。分别采用纳米PCR和常规PCR,对广西、北京、吉林送检的75份疑似CPV的临床样品进行检测,CPV阳性率分别为89.3%(67/75)和70.7%(53/75),表明该方法具有更高的敏感性,适用于CPV低含量临床样品的检测。本方法的建立为CPV感染的早期快速、灵敏、准确的诊断提供了新方法,为CPV的防控奠定基础,具有重大的临床应用意义和价值。     

猪细小病毒基因组特性的研究

<正>猪细小病毒(PPV)属于细小病毒科细小病毒属的成员。猪细小病毒病是由PPV引起的以胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身无明显症状的一种母猪繁殖障碍性传染病。1967年,Carteright等对猪的不孕、流产、死产等进行病原学研究时首次报道了本病,并从猪的流产胎儿中分离到PPV。目前,此病在世界范围内广泛流行,是造成母猪繁殖障碍的主要病因之一。探究猪细小病毒的基因组特性对临床上防治该病毒的感染起到了至关重要的作用。最近30多年来,猪群中一直使     

猪RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立定量检测猪Ⅰ型干扰素信号传导因子mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪Ⅰ型干扰素信号传导因子视黄酸诱导基因-1 (RIG-1)、Toll样受体-9(TLR-9)、干扰素调节因子-3(IRF-3)和干扰素调节因子-7 (IRF-7)的基因序列设计了特异性的引物和探针,分别构建了各自的阳性标准重组质粒,同时选择β -actin作为管家基因,建立了检测猪RIG-1、TLR-9、IRF-3、IRF-7的Taq Man荧光定量PCR方法.结果表明:所建立的检测方法荧光定量PCR扩增均无非特异性产物产生;检测下限均达1.0×101 copies/μL;批内及批间变异系数均小于3％.利用该方法对猪细小病毒(PPV)感染48 h的ST细胞中RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA的表达水平进行了检测.结果表明,RIG-1、IRF-3和IRF-7转录水平呈现上调趋势,而TLR-9转录水平呈现下调趋势.本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适于猪Ⅰ型干扰素信号传导因子的定量检测分析.     

犬瘟热病毒强毒株的分离与鉴定

选取来自黑龙江省病犬的肺脏、胰脏、肝脏、脾脏、肾、膀胱、淋巴结等组织病料,研磨上清接种非洲绿猴肾细胞（Vero）进行病毒的分离。对分离毒株进行了形态学、血清学、回归动物试验鉴定,并用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测感染细胞中的病毒核酸。分离得到的病毒在Vero细胞上可产生明显的细胞病变（CPE）,病毒形态学、血清学、回归动物试验、RT-PCR鉴定均为阳性,确定所分离的病毒为犬瘟热病毒,命名为CDV-HLJ株。     

猪细小病毒灭活疫苗安全性试验及佐剂的筛选

本研究以猪细小病毒(PPV)现地分离株(BQ)第30代细胞培养毒株作为灭活疫苗研究用种毒,通过优化病毒增殖条件和培养方法,获得较高滴度的病毒传代细胞培养物用于PPV灭活疫苗的制备.PPV细胞培养毒株分别用甲醛和β-丙内酯进行灭活,对2种灭活剂灭活的病毒液分别用国产铝胶佐剂、进口矿物质白油佐剂以及法国赛比克公司的MONTANIDETM ISA 206、ISA15AVG、IMS251CVG 3种佐剂制备10种灭活疫苗,然后分别进行10日龄乳鼠、60日龄仔猪、不同妊娠阶段母猪的安全性试验及成年豚鼠的免疫效果对比试验.通过比较不同灭活疫苗的安全性和对成年豚鼠的免疫效果,初步确认甲醛灭活的病毒液与佐剂ISA15AVG的组合为PPV灭活疫苗的最佳灭活剂和佐剂组合.     

猫细小病毒NS部分基因的克隆及序列分析

将疫苗用猫细小病毒(FPV)株提取基因组DNA,针对NS特定片段设计引物,利用PCR扩增出了部分基因并将该基因克隆到pMD18-T Vector中测序.结果表明,该基因长613bp,编码204个氨基酸.分离株基因与犬的细小病毒(CPV)、貂的细小病毒(MEV)毒株核苷酸同源性均为99%.氨基酸同源性达到97%、98%以上,与犬、貂的肠炎病毒有密切的亲缘关系.     

杆状病毒表达的兔出血症病毒衣壳蛋白的自我装配,抗原性及免疫原性

用杆状病毒系统表达了兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）衣壳蛋白。表达产物的分析表明，用抗ＲＨＤＶ抗体的ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ试验可证实６０ＫＤ重组蛋白的抗原性。细胞培养上清和纯化蛋白的直接电镜表明，在昆虫细胞表达的衣壳蛋白可自我装配形成空病毒样粒子（ＶＬＰ），其大小和形态与天然病毒类似。这些病毒粒子与抗ＲＨＤＶ的多克隆抗体以及四个识别病毒构象表位的单克隆抗体（ＭＡｂ）均有免疫反应性。表明ＶＬＰ