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Comparison of dot blot hybridization, polymerase chain reaction, and virus isolation for detection of bovine herpesvirus-1 (BHV-1) in artificially infected bovine semen. 总被引:2,自引:0,他引:2 下载免费PDF全文
Bovine semen samples spiked with bovine herpesvirus 1 (BHV-1) were used to compare dot blot hybridization, polymerase chain reaction (PCR), and virus isolation for detection of BHV-1 in bovine semen. The PCR amplification used primers targeting the BHV-1 thymidine kinase gene and a nucleic acid releasing cocktail (GeneReleaser); the PCR product was used as the DNA probe in dot blot hybridization; virus isolation was done in primary bovine fetal testis (BFT) cell cultures. Semen diluted 1:20 in tissue culture medium had the least cytotoxicity and inhibition of viral cytopathic effects in BFT cells, allowing detection of 1 TCID50/100 microL of BHV-1 suspension by virus isolation. The presence of foreign DNA such as bovine sperm DNA or salmon sperm DNA increased the sensitivity of dot blot hybridization in detecting BHV-1, allowing detection of 20,000 TCID50/100 microL of neat semen. The inhibition of PCR amplification of BHV-1 DNA in bovine semen was eliminated by diluting the samples 1:20 in tissue culture medium. The best PCR amplification was obtained when semen was diluted 1:20 and when a reaction buffer of pH 9.0, with 1.0 mM MgCl2 was used. Under these conditions, the PCR followed by ethidium bromide staining of agarose gels could detect 1 TCID20/100 microL of sample, whereas PCR followed by Southern blot hybridization could detect 0.01 TCID50/100 microL of sample.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS) 相似文献
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本文从分析同步发电机原动系统基本数学模型入手,提出了一种实现同步发电机原动系统仿真的专用可控硅直流调速系统及其实用装置。该控制系统采用有差调节的模拟调速器,水汽管道特性模拟、自平衡特性模拟和集成块模拟触发器,以及过流与超速保护,并可实现有差-无差调节的转换。 相似文献
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奶牛“两病”是指奶牛的结核病和布鲁氏菌病,是世界动物卫生组织(OIE)规定强制报告的两种疫病,二病都属人畜共患病。人的牛型结核感染主要是通过饮用生奶引起,尤其是儿童常因喝生牛奶被感染而患肠结核杆菌病;饮用生奶或制品也易感染布鲁氏菌病。奶牛“两病”严重威胁着人民的身体健 相似文献
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