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高密度培养基因工程菌的条件优化 总被引:4,自引:0,他引:4
高密度发酵是发酵工业的发展趋势之一。然而,随着发酵规模的扩大,诸多因素影响着基因工程菌的表达和产物形成量的高低。本文分析和介绍了宿主、营养、PH、温度、溶氧、比生长速率等条件对重组蛋白产生的影响及有关的研究进展。 相似文献
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环境胁迫和激素诱导甘蔗ACC合成酶基因家族三个成员的表达 总被引:1,自引:2,他引:1
ACC合成酶(ACS)是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。在克隆到甘蔗ACC合成酶基因家族3个成员Sc-ACS1、Sc-ACS2和Sc-ACS3的基础上,分别以它们作为探针,检测了激素诱导和环境胁迫对甘蔗苗期该3成员表达的影响。结果表明,乙烯利诱导Sc-ACS1在叶中表达,在根中不表达;Sc-ACS2在根、叶中表达;Sc-ACS3主要在根部表达,在叶中不表达。在甘蔗叶片中,Sc-ACS1对冷胁迫、暗培养和LiCl胁迫均有应答,并受植物生长激素IAA诱导而表达;Sc-ACS2无论是在生长激素诱导还是环境胁迫下,其mRNA均维持较低水平。 相似文献
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利用葡萄糖、木糖生产燃料酒精的基因工程菌构建 总被引:3,自引:0,他引:3
以运动发酵单胞菌的总DNA为模板,PCR扩增Zymomonas mobilis中的乙醇脱氢酶基因(adhB)和丙酮酸脱羧酶基因(pdc)。首先进行单个基因表达,基因表达产物经SDS—PAGE电泳分析和乙醛指示平板检测,确认有酶活性后,将这2个基因串联构建多顺反子表达质粒pSE—pdc—adhB,转入大肠杆菌DH5a内,得重组工程菌株。工程菌株经IPTG诱导,分别在含10%葡萄糖和10%木糖培养基中于37℃培养72h,有乙醇产生,酒精产率分别为对照菌株21倍和5倍。 相似文献
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人血清白蛋白的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
人血清白蛋白作为血浆容量扩充剂用途广泛,是当前的研究热点之一。本文综述了其结构组成、功能和表达现状。用基因工程大幅度提高rHSA的表达产量是目前重组人血清白蛋白研究的关键问题。 相似文献
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[目的]构建温泉土壤宏基因组文库并进行普鲁兰酶活性筛选,以期获得高活力、耐高温的新型普鲁兰酶基因.[方法]采用间接法提取温泉土壤样品中宏基因组DNA,经Sephadex G200(含2% PVPP)凝胶柱和电洗脱两步纯化后,扩增16S rRNA序列,通过序列比对和系统发育进化树分析温泉土壤微生物的多样性;然后以pCC1FOS为载体构建温泉土壤宏基因组文库,并对所获得的宏基因组文库进行活性筛选.[结果]利用宏基因组技术提取温泉土壤样品中微生物的基因组DNA,构建了一个约含1 146个克隆的温泉土壤16S rRNA文库,经遗传进化分析,发现温泉土壤样品中的大部分微生物未被研究过,主要来源于厚壁菌门(Firmicutes),其次为恐球菌—栖热菌门(Deinococcus-Thermus)和变形杆菌门(Proteobacteria).用提取获得的宏基因组DNA成功构建了温泉土壤微生物宏基因组Fosmid文库,文库约含2.7万个克隆,平均插入片段长度为40.0 kb,文库外源DNA总容量为1.2×10^9bp;通过活性筛选共获得9个可表达普鲁兰酶活性的克隆.[结论]宏基因组文库技术是获取极端环境微生物新酶的有效手段,可为进一步挖掘普鲁兰酶的应用潜力及研究其耐热机理奠定基础. 相似文献
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棉花纤维起始期基因表达的cDNA-AFLP分析 总被引:10,自引:0,他引:10
摘要:利用cDNA-AFLP差异显示技术比较了棉花(Gossypium hirsutum L.)品系徐州142及其无纤维突变体的胚珠在纤维起始期(开花后0和4 d)的基因表达,结果表明,在总共显示的561条带中两种胚珠各有特异带83条。将正常有纤维胚珠的差异片段47个进行反向 Northern blot检验,32个在有纤维胚珠中特异表达。选取18个在有纤维胚珠中特异表达的片段进行序列分析,结果表明,8个分别与polyphosphoinositide结合蛋白、细胞色素氧化酶亚基Ⅱ、β-葡萄糖苷酶、蔗糖合成酶、Ca2+通道蛋白、水稻高渗反应蛋白osr40、类TSO1蛋白序列有相似性;4个与拟南芥(Arabidopsis thiliana )的假拟蛋白相似;另有6个找不到相似序列。 相似文献
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丙酮酸甲酸裂解酶是肠道细菌在厌氧代谢中十分关键的酶,丙酮酸甲酸裂解酶激活因子(pyruvateform ate lyase activator,PFL-A)在功能上具有重要的作用。为进一步研究PFL-A的激活机理,以大肠杆菌K-12的基因组为模板,通过G enB ank上公布的序列设计引物,扩增出目的基因,克隆到pM D 18-T载体,经测序,所扩增出的基因与p f l-act基因具有99%的同源性。将p f l-act连接到高效表达载体pET-22b( )中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,结果发现,p f l-act以包涵体形式表达。改变诱导剂、诱导剂量或培养温度,对包涵体的形成均没有明显的影响。 相似文献
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巴斯德毕赤酵母分泌表达载体pPICINU是利用来源于克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)的菊粉酶基因信号肽DNA序列(ISP)构建的。表达实验结果表明,带有分泌表达载体pPICINU的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因重组菌,具有与带有表达载体pPIC9K(带有α因子信号肽)的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因重组菌相同的分泌效率。 相似文献
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从生物信息学角度,利用生物学数据库(GenBank、Swiss-Prot、PDB)和分子生物学分析软件Vector NTI8.0,对大肠杆菌K—12中的多个丙酮酸甲酸裂解酶(pyruvate formate-lyase,PFL)进行序列的比较分析和结构预测,进而分析其活性位点、相关保守位点和特殊结构域及序列的二级结构,为利用理性设计改造丙酮酸甲酸裂解酶提供一定的信息。 相似文献