果实特异启动子调控薄皮甜瓜ACC合成酶cDNA反义表达载体的构建

应用反义RNA技术抑制甜瓜成熟过程中内源乙烯的合成,从而培育耐贮运品种是解决甜瓜延熟保鲜难题的可行新方法。根据GenBank中甜瓜、黄瓜ACC合成酶基因氨基酸保守序列设计引物,从成熟的薄皮甜瓜(齐甜1号)果肉组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到约0.7kb的ACC合成酶cDNA片段,将其克隆到质粒载体pGEM-TEasy中,测序表明,该基因为777bp,编码258个氨基酸;从番茄(东农706)叶片组织中提取总DNA,经PCR扩增得到约2.2kb的E8基因片段,将其克隆到质粒载体pGEM-TEasy中,测序表明,该基因为2192bp;以pCAM2301为起始植物表达载体,pCAM-GT为中间载体,成功构建了果实特异启动子(E8)调控薄皮甜瓜ACC合成酶cDNA反义表达载体,采用冻融法将其转入根癌农杆菌LBA4404,得到了完整的Ti质粒表达载体系统。     

反义RNA技术在培育延熟保鲜蔬菜新品种上应用

蔬菜生产经营中,一个重大难题是果实如何延熟保鲜,如何延长果实的货架寿命.现在广泛采用的气调贮藏或使用保鲜剂等方法所能保鲜的时间有限,而且成本高.因此,培育延熟保鲜蔬菜品种是一个非常重要的育种目标.采用生物技术寻找与果实保鲜性能相关的目的基因,从遗传物质上进行改造,就能从根本上解决果实延熟保鲜问题.为此,科学家们在这方面做了大量工作,并把重点放在如何阻断果实中乙烯的生物合成上.     

朝天椒辣椒素生物合成途径基因对茉莉酸的响应

为了探索茉莉酸(JA)对辣椒素生物合成途径基因表达的调控作用,该研究利用100μmol/L的JA处理朝天椒果实0、4、12、24和48h后,利用荧光定量PCR检测辣椒素合成途径基因mRNA表达变化,并用高效液相色谱测定处理0、1、3、6、10和15 d后果实辣椒素含量的变化.结果表明,JA可以不同程度地促进朝天椒中pal、C4h、Comt、4Cl、Hct、Pamt、Bcat、FatA和pun1基因的mRNA表达,进而促进辣椒素的合成.     

强农素对番茄主要壮苗指标的影响

蔬菜育苗是蔬菜生产中的关键技术之一,它关系到蔬菜抗病、优质、丰产。因此如何培育壮苗一直是广大菜农关心的问题。为此我们探讨了强农素对番茄几个壮苗指标的影响。1 试验材料和方法1.1 试验材料 试验材料为番茄,强农素。     

猴腿蹄盖蕨孢子萌发和成苗影响因素初探

为了提高猴腿蹄盖蕨孢子人工培养成苗效率，以猴腿蹄盖蕨孢子为外植体，通过在组织培养中加入不同种类激素和NaH2PO4及活性炭，探讨了猴腿蹄盖蕨孢子萌发和成苗影响因素。结果表明：20mg/LGA3处理成熟孢子5min，孢子萌发速度加快；NAA、2,4-D、BA、KT四种激素中KT促进孢子萌发效果最好，BA和NAA次之。1/2MS，MS两种培养基中，1/2MS培养基孢子萌发速度快于MS培养基；NaH2PO4浓度以200~300mg/L可促进幼苗迅速生长，形成大量丛生苗；培养基中添加2%活性炭有利于小苗的生长。     

非生物胁迫诱导的玉米蛋白激酶基因ZmCIPK3的cDNA克隆和表达特性

类钙调磷酸酶B亚基互作蛋白激酶(calcineurin B-like calciumsensor interactingProtein Kinase,CIPK)在植物非生物胁迫信号转导中起重要作用。应用分子克隆的方法在玉米(Zea mays)中克隆了一个cDNA全长为1 350 bp的蛋白激酶基因ZmCIPK3(GenBank登录号为EU873319)。其编码的蛋白含有449个氨基酸,分子量为50.89kD,等电点为8.26。推断的ZmCIPK3催化结构域中包含蛋白激酶催化结构域保守的11个亚结构域,蛋白C端具有植物CIPK蛋白家族特有的包含24个氨基酸的NAF结构域。半定量RT-PCR结果表明,在玉米幼苗叶片中,ZmCIPK3响应甘露醇、氯化钠、ABA和4℃低温的诱导,其转录水平在12 h内呈上升趋势。ZmCIPK3是一个新的玉米蛋白激酶基因,响应多种非生物胁迫信号。     

番茄苗期CMV、TMV和叶霉病多抗性鉴定技术研究

番茄CMV、TMV[1,6]和叶霉病[2,3]是棚室番茄的几种主要病害,其严重影响番茄的产量和品质[7].目前生产上主要采用药剂防治.其结果造成农药残留超标,影响人体健康;同时也不符合发展绿色有机农业的要求.而应用抗病品种是解决CMV、TMV和叶霉病危害最有效的方法,本文为此探讨了CMV、TMV和叶霉病在番茄苗期的多抗性鉴定技术.     

基于学生反馈的普通植物病理学实验教学现状与探索

针对《普通植物病理学》实验教学中学生反馈存在的诸多弊端,提出了应对策略,通过构建多元化的反馈渠道、拓宽反馈节点、灵活的教学规划、反馈纳入考核等多方面进行完善,通过调查问卷形式统计分析学生对普通植物病理学实验中应用学生反馈形式的教学满意度。分析结果发现,这种学生反馈形式的教学不仅提高了学生的学习效率,还提高学生的参与实验的兴趣和团队协作意识。     

辣椒素生物合成途径基因pal克隆及原核表达分析

以辣椒品种"益都红"胎座RNA反转录的cDNA为模板,根据pal基因保守序列设计引物,PCR扩增得到1条全长2157bp的目的片段。该基因包含有完整的开放阅读框架,编码718个氨基酸,预测的分子质量为73ku。与多种植物PAL的氨基酸序列有一定的同源性,其中与同科同属植物朝天椒的同源性最高。应用分子克隆的方法成功地构建了pET-32a-pal重组表达质粒,优化得到诱导表达的最佳条件为:IPTG0.3mmol·L-1,温度28℃,时间6h,经SDS-PAGE检测6×His-PAL在E.coli中得到了高效表达,重组蛋白分子质量约为93ku。因此,该基因的克隆与原核表达为深入研究辣椒PAL的基因结构、生物活性、表达调控机制以及辣椒素的生物合成机制奠定了重要基础。     

控制辣椒辣味基因Pun1的克隆及表达

[目的]对控制辣椒辣味基因punl的克隆及表达进行研究. [方法]以益都红(Capsicum annuum L)为材料,获得Capun1基因cDNA序列,全长l 457 bp,编码440个氨基酸:研究了其瞬时表达、原核表达和实时荧光定量表达.[结果]系统进化分析显示,CAPUN1与同属C chinense辣椒PUN1遗传距离最近,为0.019 3.构建植物表达载体pCAM-Punl-GFP转化烟草瞬时表达,发现融合基因Punl::GFP编码的蛋F白定位在细胞膜上.构建原核表达载体,通过SDS-PAGE和Western Blot检测,得到了一个分子量为63 ku的诱导蛋白.实时荧光定量表达发现Punl基因在花后30 d表达量最高,而后开始下降,花后40和45 d基本不表达.[结论]该研究为研究辣椒辣味基因Pun1的调控分子机制提供了信息和参考.