三七素提取工艺及检测方法的优化

本研究以三七（Panax notoginseng）植株及其产品和近缘种为研究对象,采用L₉(3 ⁴)正交试验对三七素的提取工艺进行了优化,然后利用HPLC法检测三七素含量,并对各样品中的三七素含量进行了比较分析。结果表明：优化后的三七素提取条件为超纯水、料液比1∶20（g/mL）,提取1次（10 min）;三七素在三七花蕾中的含量最高,其次是根状茎和主根,但是三七茎叶中也有较高含量的三七素,说明三七花蕾和茎叶均可作为三七素的提取原料;在三七产品中三七花的三七素含量最高,达到3.33%,其次是剪口（根状茎）、筋条（侧根）和须根;但三七素的含量与三七个头大小（头数）并无明显的相关性;在三七近缘种姜状三七（P. zingiberensis）和野三七（P. vienamensis var. fuscidiscus）主根、珠子参（P. japonicus var. major）根状茎中的三七素含量显著低于三七主根三七素含量,也显著低于三七其他部位的三七素含量,说明三七是最佳的三七素来源植物。三七素的含量主要受到物种和部位的影响,与产品规格无关。本文所建立的三七素提取方法和HPLC检测方法,能够快速简便、稳定可靠测定样品中三七素含量;并可为三七素相关标准的建立奠定基础,为三七的综合利用开发提供依据。     

湖南报春苣苔的花部特征及其繁育系统研究

目的研究滇龙胆花粉活力、花粉粒形态、柱头可授性、传粉者及访花行为,明确滇龙胆的传粉生物学特征。方法采用TTC染色法、醋酸洋红染色法、I₂-KI染色法和过氧化物酶法检测花粉活力;用FEIQUANTA 200扫描电子显微镜观察花粉粒形态;用联苯胺—过氧化氢法测定柱头可授性;人工观察并记录访花者种类及其访花频率。结果最适合测定滇龙胆花粉活力的方法为过氧化物酶法,开花后第3天滇龙胆花粉活力达到最高 (65.98%)。在同一天中花粉活力也会发生变化,开花当天花粉活力在14：00达到最高 (64.71%),之后花粉活力开始显著下降。滇龙胆花粉粒外观呈球形,具有3条萌发孔沟,属于N3型花粉,花粉外壁条纹形成网格状。柱头在开花第4、5天出现极强柱头可授性,柱头可授性分别达57.69%和63.16%。滇龙胆的访花昆虫主要为蜂类和蚁类,在11：30—12：30访花昆虫数量最多。蜜蜂为最主要传粉昆虫。结论本研究对滇龙胆植物的有性生殖规律具有重要意义,为滇龙胆资源保护和引种栽培提供参考。     

川续断传粉生物学特征研究

【目的】研究川续断的花粉活力、柱头可授性、访花昆虫和花粉粒的形态结构,确定其传粉生物学特征。【方法】以白色和紫色花药的川续断为试验材料,利用TTC法、I₂-KI法和过氧化物酶法测定花粉活力;采用联苯胺—过氧化氢法测定柱头可授性;人工记录和观察柱头的发育变化,统计访花昆虫的种类和数量;利用电子显微镜观察花粉粒的形态结构。【结果】川续断的花粉活力在开花当天最高,14:00花粉活力最大,之后花粉活力逐渐降低。开花第3天柱头开始具有可授性,第5～6天柱头可授性达到最大,说明川续断为雌雄异熟、雄性先熟类型。访花昆虫主要有蜂类、蝶类和蝇类等10余种昆虫,蜜蜂类为主要传粉者,访花高峰期出现在11:30—12:30和16:00。川续断花药为条状,花粉粒具有3个萌发孔,为近球形的等极花粉粒,属于大花粉粒,花粉表面布满刺状突起。【结论】研究结果可为川续断的良种繁育、杂交育种及高效栽培措施奠定理论基础。     

比较转录组分析云南黄连开花过程对低温的应答

为了研究云南黄连在开花过程中对低温的响应,本研究观测了云南黄连在不同温度条件下的开花率和开花过程中花朵内温度和环境温度的变化,并对早(6:00)、中(12:00)、晚(18:00) 3个时间段的云南黄连花朵进行转录组测序,比较云南黄连花朵3个时间段的基因表达差异。结果发现,云南黄连阳坡(>10℃)开花率显著高于阴坡(<5℃),早上时云南黄连花朵内温度是1.19℃,显著高于环境温度。在转录组分析结果中共得到了67 607 Unigenes差异表达分析确定,在早上和中午的花朵比较中共得到4 839个差异基因,中午和晚上的花朵比较中共得到2 287个差异基因。差异基因的KEGG和GO富集结果表明,温度越低云黄连花朵能量代谢过程越快,大量抗逆境基因高表达,提高云南黄连花朵的抗逆性,保证了云南黄连生殖生长的顺利进行。云南黄连是典型的高山耐寒濒危药用植物,通过云黄连开花过程中对低温的响应研究,揭示了云南黄连抗低温的分子机制,有利于云黄连的繁育,同时也为植物响应低温的热感应途径提供新的依据。     

川续断皂苷合成路径关键基因的挖掘与生物信息学分析

川续断有滋补肝肾、强健筋骨、续接折伤、止崩漏的作用,主要有效成分为齐墩果烷型的三萜皂苷。为了探究川续断三萜皂苷生物合成途径及其关键酶的功能,本研究利用转录组测序对川续断三萜皂苷合成路径中的关键酶基因进行挖掘,并对相应核苷酸序列、氨基酸序列以及蛋白质结构特征等进行生物信息学分析。结果获得了鲨烯环氧酶3条候选基因、β-香树素合成酶1条候选基因、催化合成齐墩果酸的细胞色素氧化酶P450 6条候选基因、催化合成常春藤皂苷元的细胞色素氧化酶P450 8条候选基因以及催化合成崴岩仙皂苷A的糖基转移酶12条候选基因。本研究结果为川续断三萜皂苷合成通路的完全解析、川续断皂苷的生物合成以及川续断遗传改良和分子育种提供分子依据。     

滇龙胆中细胞色素P450还原酶基因的克隆及生物信息学分析

细胞色素P450还原酶在体内可催化许多反应,通过FAD和FMN辅基将NAD(P)H的电子传递至细胞色素P450酶,从而使细胞色素P450酶同底物产生氧化还原反应,起到电子供体的作用.本研究对药用植物滇龙胆(Gentiana rigescen Franch.)的细胞色素还原酶基因GrCPR1进行克隆、生信分析和异源表达....     

滇龙胆开花物候与交配系统研究

通过对滇龙胆的开花物候与交配系统进行观测,统计不同处理的结实率和结籽率,分析滇龙胆开花物候与交配系统等繁育特征.结果表明:滇龙胆花期在10月中旬至12月中旬,单花花期持续17～19 d,单个花序花期可持续33～37 d,单株水平花期可持续8周,群体水平开花期持续时间为60 d以上,具有雌雄异位和雌雄异熟特征.滇龙胆杂交...