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一个与稻瘟病菌无毒基因AVR-Pik~m连锁的SCAR标记的分离 总被引:6,自引:2,他引:6
本研究将以前在稻瘟病菌菌株S1522获得的与决定对水稻品种梅雨明无毒性的基因(AVR-Pikm)相连锁的1个RAPD标记OPO121000进行了克隆和鉴定。核苷酸序列测定与分析结果表明:OPO121000的大小为946个碱基,不含有与已报道的稻瘟病菌Mg-SINE、Fosburry、Magyy、Grasshopper、Pot2以及Pot3等同源的重复序列。根据OPO121000的核苷酸序列,设计了1对24个核苷酸的特异引物,对无毒表型亲本S1522和毒性表型亲本S159、无毒表型群体基因池、毒性表型基因池以及有性杂交后代108个菌株进行了PCR扩增,所有无毒表型的菌株均能特异性地扩增出1条与OPO121000大小相同的DNA条带,而毒性表型的菌株除5个重组个体外,均不能扩增出这条特异带。此结果表明,与稻瘟病菌无毒基因AVR-Pikm连锁的RAPD标记OPO121000被成功地转化为SCAR标记,为进一步通过染色体步移克隆该无毒基因奠定了基础。 相似文献
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稻瘟菌诱导的稻叶脂氧合酶的纯化及部分氨基酸序列测定 总被引:1,自引:1,他引:1
作者对已报道的稻瘟菌诱导稻叶脂氧合酶CM-LOX 1和CM-LOX 2的纯化方法作了进一步改进和完善。改进后的纯化方法可缩短该脂氧合酶的纯化时间,并提高纯化倍数。利用改进的方法,作者从20 g非亲和性稻瘟菌小种接种稻叶中获得了电泳纯的酶蛋白CM-L OX 1 133 μ g和CM-LOX 2 208μg。在此基础上,采用特异性的蛋白酶endoproteinase Lys-C和溴化氰对该酶蛋白进行了裂解,回收其肽段,得到了CM-LOX 1的3个不同肽段共30个氨基酸和CM-L OX 2的7个不同肽段共87个氨基酸的序列,为最终克隆这2个酶的基因奠定了基础。 相似文献
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为纪念《植物病理学报》创刊50周年,进一步加强学术交流,反映我国植物病理学界近年来的研究进展,《植物病理学报》增刊(2005)终于与大家见面了。 2005年7月24日至28日,在河北农业大学成功召开了“2005年学术年会暨《植物病理学报》创刊50周年纪念大会”和“第四次全国植物病毒及病毒病害学术讨论会”。该学术交流会由中国植物病理学会及其病毒专业委员会主办,河北农业大学、河北省植物病理学会承办。为便于会议期间的学术交流,会前中国植物病理学会汇编了《学术论文摘要集》,并决定会后出版《植物病理学报》增刊。增刊的出版得到了广大与会代表的大力支持和积极响应。 相似文献
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腥黑粉菌属3种检疫性真菌rDNA-IGS区的扩增及其序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了发掘腥黑粉菌属检疫性真菌的特异性分子标记,本研究对来自不同地区的3种检疫性腥黑粉菌:小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa)、小麦网腥黑穗病菌(T. caries)和小麦光腥黑穗病菌(T. foetida)的IGS区进行了PCR扩增和序列测定,其IGS1和IGS2区的长度分别为1 511~1 513bp和1 196~1 199bp,G+C含量分别为52.6%和49.0%。用DNA-MAN软件进行比对分析发现,这3种真菌在IGS1区存在不同程度的多态性,而IGS2区的保守性很强,没有特异性的碱基位点存在。依据它们在IGS1区序列的差异,设计了一对特异性引物,可用于T. foetida的分子检测,这是首次利用分子生物学技术对该菌进行鉴定。 相似文献
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通过筛选稻瘟菌(Magnaporthe grisea)P131小种的REMI(Restriction enzyme mediated integration)转化体库,获得1株对水稻品种爱知旭品种特异性改变的突变体MS220。Southern及质粒拯救分析表明:外源质粒在基因组中的整合为单位点、双拷贝反向串联插入。以质粒拯救所获得的侧端序列为探针,通过对爱知旭的毒性菌株和无毒菌株在插入位点处的RFLP分析,结果表明:两者在SacI酶切的泳道内出现了明显的多态性,由此推测,控制野生型菌株P131的无毒相关基因,由于外源质粒插入而发生突变。因此,可以以此为标记,克隆控制该表型的基因。 相似文献
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利用稻瘟病菌(Magnaporthegriesa)连续6个发育时期的材料构建了一个混合cDNA文库。文库滴度,重组率和插入片段长度等质量分析表明,构建的文库包含完整的稻瘟病菌基因,可用于病菌基因表达分析。利用该文库获得了7456条5′端表达序列标签(ESTs)(GenBank收录号:(CK909944 ̄CK913666和CK928583 ̄CK932582),生物信息分析表明:EST序列拼接出2975个假定独立转录本(TUTs),冗余度为60.1%;从cDNA文库中筛选出大量的低丰度表达基因,约占TUT总数的79.8%,说明在文库中基因组成类型的复杂性较高;在所有TUTs中,功能未知基因约占85.5%,编码ECM33蛋白和疏水蛋白等病菌致病相关的注释基因高丰度表达,进一步表明该cDNA文库反映了病菌侵染和发育过程中基因表达的状况。 相似文献
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离体水稻叶片划伤接种鉴定稻瘟菌的致病型 总被引:1,自引:0,他引:1
抗瘟品种的培育和抗瘟基因布局需要快速、准确、大规模地定性水稻抗源及其后代的抗瘟基因型和稻瘟菌致病型。为此, 本研究建立了水稻离体叶片划伤接种方法。该方法依据主效抗瘟基因抵抗稻瘟菌在寄主体内扩展的特点, 通过针刺在水稻叶片上造成伤口, 避免了寄主侵入抗性的干扰, 从而有利于抗扩展性的定性鉴定。作者利用活体喷雾接种、叶片无划伤接种和本研究建立的离体叶片划伤接种等3种接种方法, 在秧苗4~6叶龄期, 对菌株12-DG-68在24个水稻抗瘟单基因系上的致病反应进行了测定, 结果显示:叶片划伤接种的检测结果稳定、一致; 而叶片无划伤接种和活体喷雾接种的检测结果假抗性比例分别为12.5%和4.2%, 不同叶龄期的叶片间反应型不一致率达7%。此外, 离体叶片划伤接种还可利用菌丝块接种, 以鉴定分生孢子产量低的菌株的致病型。因此, 水稻叶片划伤接种是一种准确、稳定和方便的稻瘟菌接种方法, 可用于大规模定性测定水稻抗源及其后代的抗瘟基因型和稻瘟菌的致病型。 相似文献
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稻瘟菌无毒基因AVR-Pikm的定位 总被引:8,自引:0,他引:8
无毒基因是病原物中决定寄主抗病性表达与否的功能基因,其功能的丧失导致毒性小种的产生。在先前的研究中,本研究小组从稻瘟病菌中分离了与无毒基因AVR-Pikm连锁的2个SCAR标记SCO12946和SCE121406。在本研究中,作者首先通过TAC克隆末端核苷酸序列的测定及其与70-15全基因组序列的比较,将这2个标记定位到稻瘟菌第1号染色体上;然后,利用稻瘟菌70-15全基因组草图序列和SSR技术,又分离了与无毒基因AVR-Pikm连锁的4个SSR标记:SSR47T34、SSR50CA24、SSR52TAGG18和SSR56A28。进一步分析表明:上述4个SSR标记位于与SCO12946和SCE121406相反的一侧,与AVR-Pikm位点的遗传距离分别为4.90、7.01、19.12和21.94cM,无毒基因AVR-Pikm位于SCE121406和SSRA7T34之间。本研究获得的稻瘟菌无毒基因AVR-Pikm的精细定位为通过染色体步移克隆该基因奠定了基础。 相似文献