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从鼠的肝脏组织中提取总 RNA,采用 RT- PCR获得了鼠层粘蛋白 ( laminin)α5链的 E3 ( L G4 - 5)、L G4 和 L G5等 3个基因片段 ,与 NCBI数据库参考序列相比 ,同源性在 99%以上。将 E3 ( L G4 ,5)、L G4 和 L G5定向克隆到原核高效表达载体 Pet- 2 8a中 ,构建 Pet- 2 8a- E3 、Pet- 2 8a- L G4 、Pet- 2 8a- L G5等 3个原核表达质粒。将表达质粒转化表达受体菌 BL2 1中 ,IPTG诱导表达。收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western- blotting分析 ,结果显示 ,这 3段基因在原核细胞中成功表达 ,薄层扫描显示表达蛋白占细胞总蛋白的 2 0 %以上。大量提取包涵体 ,纯化后免疫家兔 ,8周后得多克隆抗体 ,间接 EL ISA在抗体稀释到 1∶ 1 2 80 0时仍为阳性 相似文献
3.
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从潜伏期感染马立克氏病病毒(MDV)鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得MDV的L-meq、meq基因,将其插入pMD18-T克隆载体,经测序并进行了序列分析。结果表明,L-meq、meq基因同源性很高,L-meq中只有180bp与meq不同。但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因。为了进一步研究发病期L-meq基因消失的原因,试验对L-meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析。结果表明,L-meq基因中含有9个PRR(proline-rich-reapts)区域,meq中含有6个PRR区域,从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关,该180bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因,同时也意味着L-meq基因对于潜伏期的维持是必要的。 相似文献
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在对生长激素释放因子(GRF)基因改造和化学合成,并构建了其真核表达载体pCDNA3-GRF(1-32)的基础上.用Lipofectin将上述载体转染CHO细胞进行瞬时表达,采用体外单层垂体细胞培养的方法对表达的GRF(1-32)进行了体外生物活性测定,即先将垂体用酶进行消化,再将消化细胞培养,形成单层细胞,利用其能合成与释放生长激素的能力来检测GRF的活性。结果表明:表达产物可刺激生长激素释放,并且比对照组提高3.8倍, 相似文献
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为研究鸡p15INK4B蛋白的功能及为制备此蛋白的单克隆抗体提供材料,应用引物搭桥法合成p15INK4B基因,应用基因工程的手段构建p15INK4B基因的原核表达载体,在E.coliRosetta(DE3)菌进行融合表达,并对表达产物进行亲和层析纯化。结果成功地构建了p15INK4B基因原核表达载体,经亲和层析制备了较高纯度的目的表达产物。 相似文献
10.
为探讨甲肝DNA疫苗的可行性,利用DNA重组技术将甲肝病毒(HAV)复合多表位抗原基因VPx插入到乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因中,得到CVPx融合基因。将CVPx克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,并在大肠杆菌中进行表达,表达的蛋白进行Western Blot及ELISA检测,结果表明:融合蛋白具有甲肝病毒表位抗原的反应原性。 相似文献