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LEAP-2 (Liver expressed antimicrobial peptide-2) 抗菌肽是一类主要在动物肝脏中表达的小分子肽,其生物学活性来自成熟肽区域,它们在动物的免疫系统中发挥了重要作用。本文以斑点叉尾鮰 (Ictalurus punctatus) LEAP-2成熟肽(mLEAP2)为研究对象,拟通过建立毕赤酵母表达系统,实现mLEAP2在毕赤酵母中的重组DNA表达,以期获得具生物学活性的重组体mLEAP2 (rmLEAP2),为进一步研究其功能和扩大制备奠定基础。首先以既有的斑点叉尾鮰mLEAP2的原核表达载体“pET-32a-mLEAP2”为模板,通过PCR扩增,获得5’端含EcoRⅠ酶切位点、3’端含NotⅠ酶切位点及6×his标签的LEAP-2成熟肽基因mLEAP2,然后将其与真核表达载体pPIC9K连接,构建重组表达载体“pPIC9K-mLEAP2”;电转化至毕赤酵母GS115细胞中,经不同浓度G418和选择性培养基筛选,获得高拷贝酵母转化子;在29 ℃、250 r/m条件下,以0.5%的甲醇对其诱导表达120 h;采用固化金属离子亲和层析(IMAC)对表达产物进行纯化,通过MALDI-TOF/TOF质谱对纯化产物的结构进行分析和鉴定。结果表明：表达的重组体蛋白为预期的目的蛋白rmLEAP2,其表达量约2.2 mg/L;另一方面,抑菌实验结果显示rmLEAP2具有明显的抑制枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的活性。 相似文献
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黄金桂又名黄棪,原产于福建省安溪县罗岩,近几年来随着乌龙茶市场的发展,在南靖县靖城一带也发展了不少,这里气候暖和,一年可采五六轮茶,茶叶质量上乘。黄金桂以其独特的“透天香”品质特点与早上市的优势,深受广大消费者喜爱。为了充分发挥该茶的品质优势,现就其制作工艺谈些浅识。 1.采摘春茶在清明前采摘,采摘标准为三叶一芯中开面;夏茶一般在夏至前后采摘,标准为三叶一芯初开面;暑茶在大暑后、处暑前采摘,标准为三叶一芯初开面,秋茶在秋分至寒露采摘,标准为三叶一芯开面。各季茶的 相似文献
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