绿海龟细菌性疾病流行病学调查

中国绿海龟(Chelonia mydas)繁育技术的进步促进了自然保护区内绿海龟种群规模的不断增加,细菌性病原感染成为威胁绿海龟(稚龟)繁育安全的首要问题。为深入了解中国绿海龟(稚龟)细菌性疾病流行情况,在2019—2021年对广东惠东海龟国家级自然保护区内的患病绿海龟(稚龟)进行了病原菌分离鉴定,采用16S rRNA分子鉴定结合细菌生化鉴定技术,共分离鉴定疑似病原株45株,涉及10个菌属,革兰氏染色显示均为革兰氏阴性细菌。弧菌属(Vibrio)细菌19株,占疑似病原菌的42.22%,其中溶藻弧菌(V.alginolyticus)7株,占分离弧菌的36.84%,属优势弧菌。对溶藻弧菌进行攻毒与病龟组织切片分析,结果显示,溶藻弧菌对中华草龟(Chinemys reevesii)具有较高的致病力,其LD₅₀为2.99×10⁶～2.59×10⁸cfu/mL;分离的溶藻弧菌可以引起中华草龟肠道、肝脏和脾脏组织病理损伤。进一步分析45株病原菌对水产养殖允许使用的6种抗生素的耐药性,结果显示分离菌株对盐酸多西环素、复方新诺明具有较高...     

口蹄疫及检测技术进展

口蹄疫包括七个主要的血清型,被国际兽疫局(OIE)定为一类传染病,中国农业部也将其列为一类传染病.因为近年频繁爆发,严重威胁到畜禽生产和人类自身生存安全,同时由于亚型多、抗原变异性强、宿主范围广等原因,其生态学和公共卫生学意义有极其重要的作用,通过对口蹄疫的感染机制和各种诊断与防制措施进行概述,从而阐述目前口蹄疫的诊断技术进展状况和进展.     

195型柴油机启动难的原因

195型柴油机为单缸,其额定转速为2000r／min,输出功率为8．8kW。该机为手摇启动,只要做好启动前的预热工作,使机温升至20℃以上,正常情况下,手摇就能使柴油机着火。但新机或大修后的发动机经过一段时间的使用后,有的机子会出现难以启动的现象,在此对启动难的原因作如下分析。     

花鲈虹彩病毒交叉引物恒温扩增检测方法的建立

【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方法】利用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA),针对LMIV ATPase基因高保守区设计1套单交叉引物。以构建的ATPase重组质粒作为阳性模板,对反应体系中的引物浓度比,Bst DNA聚合酶、Betaine、MgSO₄、dNTP浓度,以及反应温度和反应时间进行优化;结合一次性核酸试纸条,建立可视化检测LMIV-CPA的方法。【结果】最优引物浓度比组合为交叉引物CPF1.0μmol/L,引物F3和B3均为0.4μmol/L,探针引物B1(FAM)和B2(Biotin)均为0.8μmol/L;MgSO4浓度为6 mmol/L、Betaine浓度为0.4 mol/L、dNTP浓度为0.6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为0.256 U/μL;最佳反应...     

牛朊蛋白在COS-7细胞中的表达

为研究重组蛋白pCI-PrP27-30在COS-7细胞中的表达,用pCI-PrP27-30重组表达载体转染COS-7细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果表明目的蛋白在COS-7细胞中成功表达。     

牛朊蛋白在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达

从T载体上得到的目的基因和dhfr共扩增基因真核表达载体构建了pCI-PrP102。纯化后的重组质粒通过脂质体转染CHO/dhfr-细胞,经MTX加压筛选获得稳定表达的细胞株,间接免疫荧光试验检测到目的蛋白的表达。     

牛叠朊编码基因缺失突变体的构建及在大肠杆菌中的表达

本实验室已制备出多株针对牛叠朊的单克隆抗体,为充分鉴定这些单克隆抗体针对的抗原表位,通过基因克隆表达的策略获取牛叠朊基因缺失突变体的重组蛋白,以期为单克隆抗体的表位鉴定提供物质材料。经过对牛成熟叠朊编码基因及预测蛋白结构特征的分析,设计表达9个缺失突变体的引物。以PCR扩增出叠朊基因的缺失突变体,与pET-30a（＋）表达载体连接后转入E.coli DH5α中,经双酶切和测序鉴定后将重组质粒转入E.coliJM109和E.coli BL21表达宿主菌中,经IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达产物的相对分子质量、相对表达量和反应原性。结果表明,成功构建了9个牛叠朊编码基因的缺失突变体,通过IPTG的诱导表达,其中有6个缺失突变体被大肠杆菌高效表达,并且具有较好的反应原性,这为其单克隆抗体表位的进一步鉴定奠定了物质基础。     

生物传感器在动物医学中应用的研究进展及展望

生物传感器因其具有灵敏、特异、快速、准确和经济实用等特点,在工业、农业、环境监测及生物医学等领域中相继得到了开发和应用.在动物医学领域,生物传感器发挥的作用越来越大.生物传感技术为动物基础医学研究及临床诊断提供了一种快速、简便的新型方法.文章详细地综述了生物传感器的原理及在动物医学中的应用,并对生物传感器的发展前景进行了展望.     

砂质土肥力状况及其与毛白杨生长关系的研究

对黄河故道冲积砂质上的肥力状况和毛白杨生长因子之间的关系进行了研究，着重分析了土壤养分和水分在土体中的分布规律，及其与土壤质地的关系，以及不同生长季节毛白杨的叶片营养特征和树高、胸径生长量与砂质土水分、养分含量的相关性。结果表明：砂质土肥力低下；土壤质地、养分和水分变化状况与树木生长关系密切，尤其是土壤粘粒、水分和氮素含量与毛白杨生长呈明显的正和关。故可通过施肥、灌水、改善土壤保水保肥特性来调整和控制林木生长。     

副猪嗜血杆菌S-核糖基高半胱氨酸酶基因序列分析与推导蛋白三维结构的分子模拟

利用PCR方法获得副猪嗜血杆菌S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因全长DNA,将PCR纯化产物与pMD18-T载体连接并转化E.coil DH5α菌株,重组阳性质粒测序并采用生物信息学软件对所推导的氨基酸序列进行三维结构分析。结果表明,该基因全长510bp,并与GenBank中登录的其他5株菌株luxS基因完整参考序列进行比较,同源性均在70%以上。用ExPAsy软件包预测了推导蛋白的特性,运用Swiss-PDB viewer软件的SWISS-Model处理器,并利用同源建模的思想建立HPS-luxS的三维结构。拉马钱德兰图证明,构建的luxS蛋白的空间结构是合理的。