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百合(Lilium brownii var.viridulum)是世界上主要的鲜切花之一,具有很高的观赏价值和经济价值。然而,低温会抑制百合的生长,严重时导致大面积减产。为提高百合抗冻能力,本研究对极地冻鱼(Anarhichas minor)的抗冻蛋白基因(antifreeze protein gene,AFPⅢ)进行植物密码子优化,合成抗冻基因(antifreeze gene,AFⅠ)序列。通过酶切连接的方法将AFⅠ基因插入Pcambia1390骨架载体,利用PCISV(Peanut chlorotic streak caulimovirus)启动子启动该基因的表达,构建了AFⅠ基因植物表达载体P1390-PCISV-AFⅠ。将载体P1390-PCISV-AFⅠ电击转化农杆菌(Agrobacterium)菌株EHA105,经菌落PCR检测发现载体P1390-PCISV-AFⅠ已经成功转化入农杆菌菌株中。通过农杆菌介导的遗传转化方法将AFⅠ基因转化到受体东方百合品种木门(Lily)中,经PCR鉴定,确定AFⅠ基因已整合到受体基因组中。抗冻实验以及半定量RT-PCR研究结果表明,转基因阳性植株相较于野生型植株在-2℃情况下具有良好的抗冻效果。本研究结果对于抗冻植物新品种的培育具有重要的参考价值。 相似文献
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