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利用RT-PCR技术,从纽荷尔脐橙(Citrus sinensisOsbeck)果实cDNA中分离出类胡萝卜素异构酶(Carotenoid isomerase,CRTISO)基因片段。该片断长446 bp,编码148个氨基酸。用BLAST比较其氨基酸同源性发现,该片段氨基酸残基与伏令夏橙(C.sinensisOsbeck)、番茄(Lycopersicon esculentumMiller)和拟南芥(Ara-bidopsis thaliana)CRTISO的同源性分别为99%、85%和83%,与里斯本柠檬(C.limonBurm.F.)和温州蜜柑(C.unshiuMarc.)完全一致。半定量RT-PCR分析表明,CRTISO基因在8~11月份纽荷尔果实中均有表达,10月份的表达量最大。 相似文献
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红肉脐橙番茄红素β-环化酶基因的克隆及在大肠杆菌中的功能表达 总被引:1,自引:0,他引:1
以'红肉脐橙'(Citrus sinensis Osbeck 'Cara Cara')果实中分离的mRNA为模板,经RT-PCR扩增到约1.6 kb的番茄红素 β-环化酶(lycopene β-cyclase,Lcyb)cDNA片段。序列分析表明,该cDNA长1654 bp,包含两个转录本Lcyb1和Lcyb2,最大开放读码框均为1512 bp,可编码504个氨基酸。通过PCR方法获得红肉脐橙Lcyb1和Lcyb2 cDNA编码区全长,构建了Lcyb1和Lcyb2的原核表达载体pET-CitLcyb1和pET-CitLcyb2,并通过颜色互补试验证实表达的融合蛋白6×His-Lcyb1和6×His-Lcyb2均可将番茄红素转化为β-胡萝卜素。 相似文献
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以'红肉脐橙'(Citrus sinensis Osbeck'Cara Cara')果实中分离的mRNA为模板,经RT-PCR扩增到约1.6 kb的番茄红素β-环化酶(lycopene β-cyclase,Leyb)cDNA片段.序列分析表明,该cDNA长1 654 bp,包含两个转录本Lcyb1和Lcyb2,最大开放读码框均为1 512 bp,可编码504个氨基酸.通过PCR方法获得红肉脐橙Lcyb1和Lcyb2 cDNA编码区全长,构建了Lcyb1和Lcyb2的原核表达载体pET-CitL-cyb1和pET-CitLcyb2,并通过颜色互补试验证实表达的融合蛋白6×His-Lcyb1和6×His-Lcyb2均可将番茄红素转化为β-胡萝卜素. 相似文献
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植物精油及其活性组分能降低柑橘采后病害且不影响果实品质,是一种潜在的生物杀菌剂,但存在易挥发和不稳定等问题,限制了其实际应用。将植物精油与环糊精包合能有效克服上述缺陷,提高植物精油的应用效果。为了提升植物精油组分反式-2-己烯醛对柑橘绿霉病菌的控制效果,该研究拟采用饱和水溶液法制备反式-2-己烯醛与α-环糊精(α-CD)、β-环糊精(β-CD)、γ-环糊精(γ-CD)和羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)包合物,并考察包合物对指状青霉的离体和活体控制效果,在此基础上解析效果较优包合物的结构特点和包合模式。结果显示,通过饱和水溶液法成功制备了反式-2-己烯醛与α-CD、β-CD、γ-CD和HP-β-CD的4种包合物(α-CDTH、β-CDTH、γ-CDTH和HP-β-CDTH)。外观形态结果显示,α-CDTH、β-CDTH和γ-CDTH粉末细腻绵密,HP-β-CDTH粉末粗糙,颗粒分明。4种环糊精包合物均能有效抑制P.digitatum菌丝体的生长且具有浓度依赖性,β-CDTH和γ-CDTH抑制P.digitatum菌丝体生长的最小杀菌浓度(Minimum Fugicide Concen... 相似文献
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一种适合于成熟脐橙果皮和果肉的RNA提取方法 总被引:7,自引:0,他引:7
研究了一种适合脐橙果实成熟过程中有效的RNA提取方法。结果表明利用该方法从不同成熟时期果实的果皮和果肉中提取的RNA可以有效用于RT-PC,cDNA-AFLP和RNA杂交。其A260/A230的比值超过2.0,A260/A280的比值在1.65-1.92的范围之间。另外该方法也证明可以广泛用于柑橘叶片,未成熟的幼果,枳壳幼苗和柑橘愈伤组织的RNA提取,是一种安全、方便和适用性较广的RNA提取方法。 相似文献
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‘红肉脐橙’八氢番茄红素合成酶基因的克隆与原核表达 总被引:3,自引:1,他引:2
【目的】克隆、分析‘红肉脐橙’(Citrus sinensis Osbeck cv. Cara Cara)八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase,PSY)基因,并进行原核表达。【方法】以‘红肉脐橙’果实中分离的mRNA为模板,通过RT-PCR扩增到PSY cDNA片段,并分析其序列;利用PCR技术获得‘红肉脐橙’PSY cDNA的编码区全长,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+),获得重组质粒pET-CitPSY转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。【结果】‘红肉脐橙’PSY cDNA长1 520 bp,最大开放读码框为1 308 bp,可编码436个氨基酸,核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物PSY核酸、氨基酸序列之间的相似性分别在75%和70%以上,并且发现‘红肉脐橙’PSY的N末端存在转运肽信号序列,成熟的PSY包含1个跨膜结构域。原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白6×His-PSY,Western-blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应,分子量约为52 kD。【结论】该研究为进一步开展柑橘果实色泽分子改良奠定了基础。 相似文献
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