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为建立可检测鹿流行性出血病病毒(EHDV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中EHDV的VP7基因进行序列分析,设计EHDV特异性探针并用生物素标记,与荧光编码微球偶联后与病毒VP7基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Liquichip200)检测荧光信号建立了EHDV快速高通量液相芯片检测方法。检测结果显示,该法具有较好的特异性,不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度为100个TCID50。建立了快速检测EHDV的液相芯片技术,为进一步搭建EHDV快速高通量检测平台奠定了基础。 相似文献
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猪生殖与呼吸综合症研究进展(2) 总被引:1,自引:0,他引:1
猪生殖与呼吸综合症研究进展(2)陈书琨,王贵平(深圳动植物检疫局深圳518010)(广东省农科院兽医研究所广州510640)1PRRS的流行病学1.1PRRS的发生和流行PRRS最初发生于美国。美国国家兽医服务实验室应用间接免疫荧光抗体试验(IFA)... 相似文献
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通过深入分析深圳出入境检验检疫局动检实验宣对禽流感开展的病原学检测方法和血清学检测方法,系统总结了目前动物检疫实验室禽流感检测与监测过程中常用的方法。在病原学检测方面,比较了鸡胚病毒分离鉴定方法、实时荧光PCR检测方法和乳胶凝集试验检测方法的优劣,提出了适合本实验室的病毒快速鉴定方法。鉴于生物安全的要求,对禽流感病毒检测采用施实时荧光RT-PCR,同时不断开展新的检测方法。在血清学检测方面,全面总结了在常规的HA和HI检测中的注意事项,并对近年来深圳出入境检验检疫局的血清学检测数据进行了分析。 相似文献
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为对引起腹泻症状的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA) 3种病毒同时快速地鉴别检测,本研究对GenBank中登录的TGEV的S基因、PEDV的S基因、PRo VA的NSP基因进行序列分析,分别设计了针对3种病毒的特异性引物和用3种荧光基团标记的核酸探针,通过条件优化建立了针对这3种病毒的多重荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能够特异性检测PEDV、TGEV和PRo VA,而与其它病原无交叉反应;对TGEV、PEDV和PRo VA的最低检测量分别为1.12拷贝/μL、39拷贝/μL和25拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于5%;该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率达100%。该方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为猪病毒性腹泻疾病的流行病学调查和分子生物学快速诊断奠定了基础。 相似文献
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本文应用聚合酶链反应(PCR)技术从构建的新城疫病毒(NDV)cDNA文库中扩增含编码F糖蛋白前体──Fo酶切位点序列的359bp的F蛋白基因cDNA片段。将此359bpcDNA片段经光敏生物素标记后,即成NDV-cDNA探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出NDV强毒株和疫苗毒株的基因组RNA,而不与IBDv-dsRNA、AIBv-ssRNA、EDS76-dsDNA、MDV-dsDNA,FPV-dsRNA及AILV-dsDNA发生交叉杂交反应。试验结果表明:尽管该探钎含有编码Fo蛋白酶切位点序列的碱基顺序,但它还是不能把NDV的强、弱毒株区分开。这说明NDV强、弱毒株比区域内的碱基存在着相当大的同源性。不过,此探针对NDV来说具有特异性,这就为NDV的诊断技术开创了基因水平检测的新途径。 相似文献
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本实验建立了一种Nested-PCR方法。应用方法检测5株标准株蓝舌病病毒(T4、T10、T11、T16、T20)和5株国内蓝舌病病毒分离株(CF4、AF6、Z1、H1、G14),检测结果均为阳性,而检测相关环状病毒(EHD2、EHD6、Ibraki),检测结果均生。研究证明,此方法可检测到3.5fg的BTV-RNA,灵敏度较高。该方法成功区分了蓝病病毒和相关环状病毒,比血清学方法更加优势,在临床 相似文献
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猪生殖与呼吸综合症研究进展(1)陈书琨(广东深圳动植物检疫局深圳518010)王贵平(广东省农科院兽医研究所广州51640)猪生殖与呼吸综合症(Porcinereproductiveandrespiratorysyndreme,PRRS)是近几年才流... 相似文献
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光生物素标记的口蹄疫病毒cDNA探针的制备及其对口蹄疫病毒RNA检测的试验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文首次报道了利用pF1034质粒制备FMDV O型特异性探针,并通过PCR反应扩增FMDO_1K株病毒基因组的第2962位与3071位之间共110bp序列,制备了能检测O型、A型和亚洲I型FMDV RNA的群(组)特异性探针。用硝酸纤维素膜斑点杂交试验表明,二者均能检测出10pg水平的O_9K毒株的纯RNA;但前者只与O型FMDV RNA杂交,与A型及亚洲I型FMDV RNA无交叉杂交现象;而后者则能与O型、A型和亚洲I型的FMDV RNA发生杂交反应。对照试验显示:此两种探针与SVDV ssRNA、BTV dsRNA、EHDV dsRNA、DHV ssRNA、PRV DNA、乳鼠组织细胞RNA、BHK_(21)克隆13细胞RNA及DNA等均不出现交叉杂交现象,但与IBR DNA有假阳性杂交反应。 相似文献
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