菠萝叶基原生质体分离与瞬时转化体系的建立

【目的】研究菠萝叶基原生质体的高效分离方法,并对制备的原生质体进行瞬时转化,为利用菠萝原生质体进行菠萝基因功能研究提供技术支持。【方法】以‘巴厘’菠萝（Ananas comosus,‘Comtede Paris’）幼嫩叶片的叶基为材料,采用3因素3水平正交试验L₉(3³)分析纤维素酶质量浓度（6,12,20 g/L）、离析酶质量浓度（3,6,9 g/L）和甘露醇浓度（0.4,0.5,0.6 mol/L）对分离原生质体产量与活力的影响;同时,利用单因素试验（设置酶解时间2,4,6 h）筛选制备原生质体的最适酶解时间,确定分离菠萝叶基原生质体的最适条件;在最适条件下制备原生质体,采用聚乙二醇（PEG）介导法转化质粒,建立菠萝原生质体瞬时转化体系。【结果】L₉(3³)正交试验结果显示,不同处理分离的原生质体产量为1.01×10⁶~1.93×10⁶ g^-1,纤维素酶质量浓度是决定原生质体产量的关键因素;原生质体活力为65.55%~87.00%,甘露醇浓度对原生质体活力的贡献最大。最适酶解条件为：菠萝叶基在含12 g/L纤维素酶、6 g/L离析酶、0.6 mol/L甘露醇的酶液中避光酶解4 h,产量可达1.96×10⁶ g^-1,活力为85.54%。菠萝叶基原生质体通过PEG介导法转化pAN580-WRKY75质粒后,可在激光共聚焦显微镜下观察到核内的绿色荧光信号。【结论】确定了菠萝叶基原生质体的最适分离条件与瞬时转化方法,建立了适用于菠萝基因功能分析的原生质体瞬时表达体系。     

弱光胁迫对南瓜幼苗的光合特性的影响

为探讨南瓜耐低温弱光性的特性，以4个不同品系（组合）的南瓜幼苗为材料，研究不同弱光条件下南瓜叶片胞间CO2浓度、蒸腾速率、气孔导度、叶片光合速率、叶绿素初始荧光（F0）、叶绿素最大荧光（Fm）和PSII最大光化学量子产量（Fv/Fm）的影响。结果表明，弱光条件下叶片胞间CO2浓度提高，随着弱光程度的增加，叶片的蒸腾速率、气孔导度呈先增后减趋势，NY-1和JB-1在遮光40%时，蒸腾速率和启动导度达到最高值，NY-1×JB-1随着遮光程度的增加，蒸腾速率下降。光合速率10-32、JB-1呈现递增趋势，NY-1呈现递减趋势，NY-1×JB-1为先增后减趋势。10-32、NY-1、JB-1的F0表现为显著降低的趋势，10-32、NY-1×JB-1随着遮光程度的增加Fm表现为先升后降的趋势，在遮光40%时有最大值，遮光80%时最低。NY-1、JB-1随着光照程度的增加Fm都表现为下降趋势，NY-1×JB-1的F0呈现先降后升再降的趋势。10-32、NY-1、JB-1、NY-1×JB-1随着遮光强度的增加Fv/Fm均表现上升。说明以上指标可作为衡量南瓜耐低温弱光性的指标，可为南瓜作物耐弱光品种筛选提供参考依据。