金黄色葡菌球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响

本研究旨在阐明金黄色葡萄球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响，为金黄色葡萄球菌致病性研究提供理论参考。以金黄色葡萄球菌野生株SA113（WT SA113）和SA113 lgt：：ermB脂蛋白表达缺失菌株（SA113Δlgt株）体外感染M1型小鼠骨髓源巨噬细胞，分为3组：空白对照组、WT SA113感染组（MOI：3：1）、SA113Δlgt感染组（MOI：3：1）。采用ELISA法检测M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、趋化因子（RANTES）和白细胞介素10（IL-10）的水平，实时荧光定量PCR检测Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）和含NLR家族Pyrin域蛋白3（NLRP3）基因的表达，免疫荧光法检测脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌作用的影响。结果显示，与空白对照组相比，WT SA113感染组和SA113Δlgt感染组均可显著上调M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、RANTES、IL-10分泌量以及WT SA113感染组TLR2、NLRP3基因表达水平（P<0.05），而TLR4基因表达量显著降低（P<0.05）；与WT SA113感染组相比，SA113Δlgt感染组M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、IL-1β、RANTES、IL-10分泌量以及TLR2（12 h除外）、NLRP3基因表达水平显著降低（P<0.05）。免疫荧光结果显示，M1型巨噬细胞对SA113Δlgt株的吞噬作用显著低于对WT SA113株的吞噬作用（P<0.05）。综上，金黄色葡萄球菌的脂蛋白在M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中主要通过激活TLR2和NLRP3受体，诱导细胞因子TNF-α、IL-1β、RANTES和IL-10的产生和释放。     

黑皮质素4型受体在绵羊下丘脑区域的定位

黑皮质素4型受体(melanocortin 4 receptor,MC4R)作为下丘脑参与能量调控过程中的关键性受体,在动物能量代谢调节中被广泛关注。目前,关于该受体在绵羊下丘脑中分布区域的相关报道较少。针对试验过程中MC4R免疫荧光结果不稳定,分布区域不明显的特点,本研究在改进现有MC4R免疫荧光试验方法基础上,对MC4R在绵羊下丘脑的分布区域进行了观察。结果显示,分别经过4%多聚甲醛长时间固定(6 d),Triton X-100(pH≈8.68)长时间通透(2 d),以及3%过氧化氢和0.2 mol/L甘氨酸+0.3%SDS+20%甲醇的预处理后,可以获得稳定且饱满的MC4R免疫荧光结果。MC4R主要分布在绵羊下丘脑的室旁核(arcuate nucleus,ARC)区域,但在弓状核区域并无类似分布。     

TLR2和TLR4受体封闭肽对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α表达的影响

Toll样受体(Toll-likereceptors,TLRs)是参与天然免疫的一类重要的模式识别受体,在天然免疫和获得性免疫反应过程中发挥着重要的作用。观察TLR2和TLR4受体封闭肽对LPS刺激下小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)mRNA表达的影响,探讨TLR2和TLR4受体在LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞过程中对TNF-αmRNA表达影响的机制。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,采用荧光定量PCR技术检测了TLR2和TLR4受体封闭肽对LPS刺激下小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α基因表达的影响。结果显示,与LPS刺激组相比较,CP对照组TNF-α基因的表达量无显著性差异(P>0.05),TLR2和TLR4受体封闭肽作用组TNF-α基因和蛋白的相对表达量极显著性降低(P<0.01)。由此可知,TLR2和TLR4受体封闭肽对促炎性细胞因子TNF-α基因的表达存在抑制效果。     

牛结核病及其检测方法

牛结核病主要是由牛型结核分枝杆菌引起的一种人兽共患的慢性传染病,近年来该病发病率有所上升,给奶牛养殖业造成了巨大的危害。主要对牛结核病的流行病学、临床症状、诊断方法等作一介绍,并分析了几种常用诊断方法的优、缺点,指出在普查牛结核病疫情时,比较合理的做法是迟发性变态反应试验和间接ELISA法同时运用。     

内蒙古部分地区规模化牛场常见寄生虫的流行病学调查

为了解内蒙古部分地区规模化牛场牛体寄生虫的感染情况,从2015—2017年,采用饱和盐水漂浮法、离心沉淀法、麦克马斯特氏虫卵计数法、血清学和免疫学等方法,对内蒙古呼和浩特市和锡林郭勒盟等地的牛场进行了流行病学调查。结果显示：所检牛群主要感染的寄生虫为毛圆科线虫和艾美耳球虫;2015年还检出了新孢子虫,个别牧场有肺丝虫检出;未有吸虫、绦虫、血液原虫和毛滴虫检出。在为期3年的调查中,经针对性地治疗,寄生虫的感染率呈显著的下降趋势。这些数据的取得为了解所调查牧场的寄生虫感染状况,并根据调查数据开展相关寄生虫的防治工作提供了重要信息。     

金黄色葡萄球菌体外刺激奶牛外周血中性粒细胞对炎性因子分泌的影响

以体外培养的奶牛中性粒细胞为研究对象,用瑞氏姬姆萨染色和台盼蓝拒染法对分离培养的奶牛外周血中性粒细胞进行鉴定和活性检测,ELISA检测金黄色葡萄球菌感染体外培养的奶牛外周血中性粒细胞IL-1β、TNF-α、IL-10及IL-8的分泌情况,Western blot检测金黄色葡萄球菌感染体外培养的奶牛外周血中性粒细胞中NF-κB的激活效应。结果显示,体外分离培养的奶牛外周血中性粒细胞纯度达99%,随着培养时间增加奶牛外周血中性粒细胞活性逐渐降低。ELISA检测结果显示,在3 h～24 h刺激时间范围内,随着金黄色葡萄球菌刺激时间的增加,与空白对照组相比体外培养的奶牛外周血中性粒细胞中IL-10、TNF-α、IL-1β和IL-8的分泌量均显著升高(P<0.001)。Western blot检测结果显示,在15 min～120 min刺激时间范围内,随着SA113感染时间的增加,与空白对照组相比体外培养的奶牛外周血中性粒细胞中IκBα磷酸化水平显著升高(P<0.001)。研究结果表明,成功分离培养了奶牛外周血中性粒细胞;金黄色葡萄球菌(SA113株)刺激体外分离培养的奶牛外周血中性...     

EP2受体激动剂Butaprost对奶牛子宫内膜上皮细胞中血管内皮生长因子基因表达的影响

[目的]观察EP2受体激动剂Butaprost对奶牛子宫内膜上皮细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达的影响,探讨前列腺素类化合物对奶牛子宫内膜组织修复的机制。[方法]分离培养奶牛子宫内膜上皮细胞,采用荧光定量PCR技术检测EP2受体激动剂Butaprost对奶牛子宫内膜上皮细胞中VEGFmRNA表达的影响。[结果]10-6mol/L的Butaprost作用于奶牛子宫内膜上皮细胞4、8、16、24h可显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)地促进VEGFmRNA的表达。[结论]EP2受体激动剂Butaprost能够促进奶牛子宫内膜上皮细胞中VEGF基因的表达。     

利用套式PCR法检测内蒙古部分地区奶牛隐孢子虫感染情况及其虫种鉴定

为了调查内蒙古部分地区规模化牛场奶牛隐孢子虫的感染情况及其虫种类型,试验在4个牛场采集了295份奶牛的粪样,从粪便样品中直接提取DNA进行套式PCR法检测,之后将其目的片段克隆至p GM-T载体上进行测序和同源性分析以鉴定虫种。结果表明:可通过套式PCR法从阳性粪便的DNA抽提物中扩增出目的条带,大小分别为800 bp和505 bp;对测得的序列和NCBI上已发表的安氏隐孢子虫(C.andersoni)18S rRNA基因序列进行BLAST比对分析,相似度为100%;采集样品的阳性率为14.9%(44/295)。说明套式PCR法可用于检测奶牛粪便样品中的隐孢子虫,且在一定程度上能够很好地反映出奶牛隐孢子虫的感染情况,并能有效鉴别其虫种。     

利用MTT法检测活体线虫的主要影响因素及可行性研究

MTT法是一种灵敏、快速和便捷的计数生物活细胞的方法。为探讨这一方法用于计数活体线虫的主要影响因素和可行性,本试验以秀丽新杆线虫为研究对象,对MTT法检测秀丽新杆线虫的检测波长、MTT的用量、溶解用DMSO用量和与药物作用时间等主要影响因素进行分析,并将MTT法检测结果与显微镜直接镜检计数法结果比较。结果表明:甲瓒(Formazan)生成量与线虫活虫体数呈正相关;在试验反应体系中,MTT为10g/L,反应3h时,Formazan的最大吸收波长为550nm,溶解用DMSO最佳用量为150μL,与药物作用时间为24h;MTT法检测和直接镜检结果相似。结果表明,MTT法可用于秀丽新杆线虫虫体等的计数,且可以大大缩短检测的时间,有效减少人力的消耗,结果准确性也较高,对大批量的进行药物或其他物质对虫体活力作用的研究具有重要积极意义。     

胰淀素调控生理机能的研究进展

胰淀素(Amylin)在机体能量代谢平衡过程中具有重要作用,通过兴奋机体饱食中枢来抑制动物摄食,Amylin的受体广泛分布于第四脑室底部最后区(AP),当受体被激活后,神经信号会通过孤束核(NTS)传至前脑,同时还可通过外侧旁核(LPBN)传至下丘脑外侧区(LHA)及下丘脑其他神经核团,Amylin信号传递必须经过NTS和LPBN,此外,Amylin也是机体发生肥胖的重要信号,肥胖动物机体Amylin的血浆浓度较正常动物显著升高,脑室注射Amylin能引起体重明显降低,而注射Amylin受体的抑制剂则使体重明显上升继而引发肥胖。Amylin是一个潜在治疗肥胖的作用靶点,本文就Amylin在调节动物摄食和能量代谢中的作用进行综述。