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慢病毒介导的小鼠生长抑素shRNA序列的设计和筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
生长抑素(SS)是一种多功能的脑肠肽,在动物生长轴中主要作为生长激素(GH)的负性调控因子。本研究通过慢病毒表达质粒介导shRNA,瞬时转染自身表达SS的BHK-21细胞,筛选出了靶向小鼠SS的最有效的siRNA序列。首先,分别在小鼠SS基因mRNA的246、433和539bp处找到潜在靶位点,合成3条siRNA转录模板的发夹结构以及1条阴性对照,体外退火后插入pshRNA-copGFP lentivector构建重组质粒。然后,通过对转染BHK-21细胞的荧光观察、Real-time PCR、免疫组化以及RIA等检测,转染细胞SS在mRNA水平及蛋白水平均检测到不同程度的抑制(P<0.05)。其中,psh2(SS 433~451)表现出了最高的沉默效率(转染效率68.9%时,mRNA水平的沉默效率达59.3%,P<0.05;蛋白质水平的沉默效率达55.6%,P<0.05)。本研究为降低SS在动物体内的分泌,相应提高GH的浓度,进而为促进动物生长的研究奠定了基础。 相似文献
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采用幔病毒(LV)载体介导siRNA感染宿主细胞,研究其对内源性生长抑素(Somatostatin,SS)的抑制作用.首先将筛选出的psh2与辅助质粒共转染293T细胞包装获得假病毒颗粒LV-sh2,同时,包装产生LV-sh0和LV-GFP作为阴性对照.超速离心,梯度稀释法测定病毒滴度,结果提示所构建的重组病毒滴度约为... 相似文献
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采用慢病毒介导的shRNA沉默细胞自身生长抑素(SS)的表达,同时,以pcDNA3.1-SS(pSS)真核表达载体转染细胞作为阳性对照,研究SS对BHK-21细胞的抑制增殖作用,同时观察SS是否具有促进细胞凋亡的作用。MTT法绘制细胞生长曲线可知,pSS转染细胞的生长受到明显抑制,抑制效率为9.63%(P〈0.05);而LV—sh2组细胞的生长密度是对照组细胞的117.33%(P〈0.05),表明SS对细胞的增殖具有抑制作用。流式细胞检测细胞凋亡表明,pSS转染组和LV-shRNA感染组凋亡细胞含量分别是对照组凋亡细胞含量的1.97倍(P〈0.05)和24.30%(P〈0.05),表明SS通过诱导细胞凋亡发挥抑制细胞增殖的作用。本研究为SS及其类似物作为治疗药物的进一步开发应用提供了理论依据。 相似文献
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泊洛沙姆是一种经典的温敏型共聚物,随着温度的变化产生溶胶-凝胶的相转变,但水凝胶结构不稳定,难以长期保存,并在创伤敷料应用上功能单一.以泊洛沙姆F127和F68为基体,添加壳聚糖作为抑菌材料,制备一种可抑菌的温度响应型原位水凝胶(F127/F68/CS),可应用于不规则伤口愈合.通过试管倒置法、扫描电子显微镜(SEM)、平板涂布法以及对伤口的贴合程度对F127/F68/CS复合水凝胶的温敏性、微观形态、抑菌特性和伤口的贴合度进行了表征.结果 表明:F127/F68/CS具有温敏性,在体温下形成水凝胶;在水凝胶断面SEM测试中发现,复合水凝胶内部疏松多孔,呈现出三维网状结构;抑菌试验发现,CS的加入增加了体系的抑菌特性,且抑菌效果明显;伤口贴合度试验显示,水凝胶可以紧密贴合伤口.F127/F68/CS复合水凝胶有望在减少伤口感染,促进创伤愈合的治疗方面得以应用. 相似文献
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慢病毒介导的shRNA对MFC细胞生长抑素的沉默及对细胞增殖的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
SS能够抑制肿瘤细胞的增殖,其与肿瘤的关系已成为肿瘤学的研究热点。本研究将包装获得的靶向生长抑素的lv-shRNA病毒液感染肿瘤细胞MFC,同时,以pcDNA3.1-SS(pSS)转染细胞组作为SS过表达细胞对照,通过荧光显微镜观察到了GFP的高效表达,RIA检测发现49.55%(P<0.05)的SS受到了抑制。MTT法绘制细胞的生长曲线可知,pSS转染细胞的生长明显受到抑制,抑制效率为8.14%(P<0.05);而LV-shRNA组细胞的生长密度比对照组细胞提高了19.27%(P<0.05)。表明SS对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用。本研究首次采用SS过表达和低表达细胞表型同时验证SS对细胞的作用,为SS及其类似物在肿瘤方面的治疗提供了理论依据。 相似文献
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通过探讨不同质量浓度促渗剂月桂氮卓酮和冰片对鹿茸多肽透皮吸收的影响,优化出鹿茸多肽的给药方式,即通过口腔黏膜服用,为鹿茸运用于创伤、烧伤和美容提供依据。通过脾细胞增殖试验,检测鹿茸多肽的免疫活性。结果表明:(1)SDS-PAGE显示鹿茸酸粗提取物中含有不等量的蛋白质和多肽等,且多为大分子量多肽,但醇提多肽多为10000左右的某些小分子量多肽。(2)含5%月桂氮卓酮的醇提鹿茸多肽和含0.12%冰片的醇提鹿茸多肽比只含醇提鹿茸多肽溶液的累积透皮透过量多,说明促渗剂月桂氮卓酮和冰片能明显的增加醇提鹿茸多肽的透皮扩散速度和扩散的总量,而且0.12%冰片的促渗效率比5%月桂氮卓酮的促渗效果要高。(3)鹿茸多肽具有促进脾细胞增殖的活性,并存在剂量依赖性:醇提鹿茸多肽质量浓度从10mg/L上升到40mg/L时,对促进脾细胞增殖呈上升趋势,当质量浓度超过40mg/L时,增殖率增加不显著。 相似文献
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鲜马鹿茸不同部位多肽的提取及含量比较 总被引:2,自引:0,他引:2
采用醋酸溶液和乙醇提取了6支鲜二杠马鹿茸的主干顶部(未骨化部分)、中部(部分骨化)、根部(大部分骨化)3个部位的多肽,进行了多肤的SDS-PAGE分析和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、表皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)的Western-blotting分析。采用考马斯亮蓝G-250法进行了马鹿茸不同部位总多肽定量,RIA法测定了IGF-1含量,ELISA法比较了不同部位EGF、NGF的OD值。结果:SDS-PAGE表明鹿茸酸醇提取多肽为一系列分子量低于17kD的混合物,Western-botting证明其含有IGF-1、EGF、NGF等生长因子。定量分析表明:马鹿茸顶部、中部、根部总多肽、IGF-1及醇提多肽中IGF-1含量均差异显著(P<0.05),EGF、NGF ELISA检测OD值差异显著(P<0.05),均从顶部到根部递减。 相似文献
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近年来,生物活性肽在皮肤创伤愈合中的积极作用备受关注。文章综述了动物源性的生物活性肽在皮肤创伤愈合中的作用,重点阐述了鹿茸和林蛙皮多肽的提取及鉴定、对皮肤创伤愈合的作用机理以及临床应用形式;并阐述了猪皮、海洋贝类、海洋鱼类以及蚯蚓等动物源性的多肽对皮肤创伤愈合的研究进展,以期为动物源性生物活性肽应用于皮肤创伤愈合提供研究思路。 相似文献
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对鹿茸IGF-15’端调控序列进行生物信息学分析。提取鲜马鹿茸顶部组织基因组DNA,设计简并引物,利用PCR获得马鹿茸IGF-15’端调控序列及部分外显子(命名为CCS1074),用DNAMAN软件进行CCS1074与其他种属IGF-1基因的序列同源性分析;使用在线分析程序预测CCS1074的潜在转录因子结合位点并比较分析鹿茸区别于其他种属IGF-1的特有潜在转录因子,进行TATAbox、CpG岛、候选启动子区段及信号肽预测。结果获得了包含部分外显子的鹿茸IGF-1基因5’端(Genbank Accession No.DQ234266);序列同源性分析表明鹿茸IGF-1与牛、羊IGF-1基因5’端存在差异;生物信息学分析表明:在CCS1074180~310base处存在CpG岛,在142~192、238—288、874~924、1359~1409base处可能存在启动子,存在253个潜在的转录因子结合位点;比较发现,ZF5F/ZF5.01和HAND/HAND2-E12.01是鹿茸IGF-1区别于牛、羊、人、猪、家鼠、斑马鱼IGF-1启动子区域的潜在转录因子,这些潜在转录因子与鹿茸生长的关系尚待进一步试验证实;综合分析表明CCS1074〈1~1580base为鹿茸IGF-15’端区域,1581—1966base为外显子1,1903—1966base为信号肽,1967~〉2087base为内含子1。 相似文献