大鼠RVLG选择性剪接变异体的鉴定和分析

[目的]确认大鼠RVLG(rat vasa-Iike gene)的第7、8两个内含子的部分片段在卵巢中可能存在选择性剪接现象,进一步检测大鼠RVLG的第7、8两个内含子在卵巢和睾丸中的选择性剪接形式.[方法]从雌雄各5只Wistar大鼠的卵巢和睾丸组织中提取总RNA,反转录成cDNA后作为模板,用PCR扩增RVLG起始密码后约620-690 bp的编码区cDNA.分别选卵巢和睾丸各7个独立克隆测序,将测序结果与大鼠RVL6基因组DNA比对,分析是否有选择性剪接.[结果]大鼠卵巢和睾丸组织中各7个RVLG cDNA 编码区5'端620-690 bp的片段测序结果均存在45 bp和15 bp两处选择性剪接.在7个卵巢RVLG cDNA独立克隆中,有5个仅存45 bp而缺少15 bp,两个仅存15 bp而缺少45 bp;7个睾丸RVLG cDNA独立克隆中,4个仅存在45 bp而缺少15 bp,两个既含有15bp又含有45 bp,一个既没有45 bp也没有15 bp.经与大鼠RVLG基因组DNA序列比对后确认45 bp位于其第7内含子5'端的两个GT之间,15 bp位于第8内含子3'端的两个AG之间,剪掉或保留这两段均符合典型的GT-AG内含子剪接原则,属选择性剪接.[结论]大鼠RVLG的第7、8两个内含子在卵巢和睾丸中均存在多种选择性剪接形式,体内的标准剪接方式应该是第7外显子3'端保留45 bp,第9外显子不保留来自第8内含子的15 bp.     

电晕电场对细枝岩黄芪种子愈伤组织诱导与分化的影响

研究了不同电场剂量处理细枝岩黄芪种子对其愈伤组织诱导率和分化率的影响。结果表明,电场处理可以明显提高愈伤组织诱导率和分化率。电场强度为7kV/m,处理时间为100min,诱导培养基为MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 1.0mg/L时出愈率可达91.0%,且生长情况较好,褐变程度轻。在MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA1.0mg/L诱导培养基上继代培养后的各愈伤组织分别转移到分化培养基上进行分化培养,当电场强度为7kV/m,时间为100min时分化率最高,达到78.3%。