禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备和鉴定

以常规方法纯化H9亚型禽流感病毒，制备了两株分泌抗禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞11A5和1182，其上清ELISA效价均为1：10^4，腹水效价为1：10^7和1：10^6，HI效价上清分别为8、7log2，腹水效价均为15log2。采用HI方法证明其对禽流感病毒H9亚型的特异性，通过Western blot方法证明两株单抗都针对H9亚型禽流感病毒HA1蛋白。     

人工雌性激素己烯雌酚单克隆抗体的制备及表征

合成了己烯雌酚的半抗原CP-DES,并将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)共价偶联制备免疫原和包被原。将免疫好的Balb/c小鼠脾脏细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选出了1株能稳定分泌己烯雌酚单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D87C412C7。分析该杂交瘤细胞的染色体,并以间接酶联免疫吸附分析法(iELISA)检测了单克隆抗体免疫球蛋白的类型。获得的杂交瘤细胞的平均染色体数目为45-50对左右,它分泌IgG1亚类的单克隆抗体。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定,细胞上清效价大于640,诱导腹水效价大于108,该单克隆抗体的检测限IC20=2.3ng/ml,与己烯雌酚结构类似物存在一定的交叉反应,与两种载体蛋白(BSA,OVA)无交叉反应。本研究为己烯雌酚ELISA检测方法的建立提供了条件。     

禽副粘病毒2型(PMV-2)群特异性单克隆抗体的研究

禽副粘病毒2型（Yucaipa株）鸡胚成纤维细胞适应毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯，免疫Balb/c小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA方法筛选，有限稀释3次克隆，获得了两株分泌PMV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株6E9和7E5。经鉴定两株单抗均为IgG1亚类，杂交瘤细胞的平均染色体分别为96条和98条。细胞培养上清及腹水效价分别为1：25600、1：25600、1：51200和1：10^5、1:10^7。6E9和7E5单抗能稳定分泌抗体且与NDV、AIV、EDSV无交叉反应。间接ELISA实验表明4株PMV-2（Yucaipa株、F4株、F6株和F8株）均含有单抗6E9和7E5所针对的位点。     

半番鸭呼肠孤病毒单克隆抗体的制备

禽呼肠孤病毒（avian reovirus）在各种禽类中普遍存在,主要感染鸡,造成鸡的病毒性关节炎。番鸭的呼肠孤病毒感染,早在1950年南非就有记载,1972年法国首次从番鸭中分离到病毒。近几年来,我国闽、浙等番鸭饲养地区相继发生了一种以肝、脾、胰腺表面出现白色坏死点为特征的传染病,发病率和死亡率均较高。2001年,吴宝成等经病原分离鉴定,确定该病是由禽呼肠孤病毒引起的。其后,多位研究者分别从临床感染发病的半番鸭、鹅中分离到禽呼肠孤病毒。     

近期有关鸡病应关注的一些问题

<正>1禽流感1.1禽流感首免时间实际上防疫疫苗就比不防疫要强。要想管好生产,做到不影响生产成绩,必须免疫自家苗加Re-6。凡是禽流感疫苗,都是有效的。唯一的差别是第一次免疫的时间,实际上要根据抗体的高低来决定,我建议H5N1在10日龄左右免疫最为合适,最早不能超过7日龄。因为每次进鸡时都会消毒,做隔离防控,很注意外界的影响。所以说1日龄防疫,是错误的。通常我们的想法是尽早的建立有效抗体水平。但是对H5N1来说,晚点建立问题不大。     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶＶａｎＲｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚神经胶质细胞（ＣＥＢ）传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ、ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１∶１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释度１∶１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ、ＭＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＩＶ、Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特异性强,且简单、方便、经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

2012年鸡重要疫病的临床特征及防控措施

<正>1H5N1亚型高致病性禽流感1.1主要临床表现1.1.1雏鸡和商品肉鸡:发病后表现较为典型,死亡率高,剖检以出血性变化为主,包括肝脏、脾脏、腺胃、肾脏、胰腺、肠道、心冠脂肪、腹部脂肪、鸡冠和脚趾部鳞片等均可见到明显的出血现象。1.1.2育成鸡:发病较以前明显增加,发病后表现通常不典型,但死亡率也较高,严重可达50%以上,部分鸡有神经症状,肾脏肿大和胰腺坏死是常见的主要剖检变化,其他脏器的出血性变化亦偶尔可见。     

山东省传染性支气管炎病毒分离株的电镜观察

从山东省分离到4株病毒株，经病理剖检、鸡胚传代，血凝检测、动物回归、电镜和免疫电镜观察确证为传染性支气管炎病毒。将分离毒分别接种SPF鸡胚，制备各自的阳性血情，经磷钨酸负染，电镜和免疫电镜观察。可见到典型的冠状病毒粒子，病毒的直径界于60－200mm之间，呈多形性，有囊膜，个别有纤突。病毒大量聚集，各株病毒在形态上无差异。     

单抗捕捉ELISA检测AEV抗体方法的研究

本研究初步建立了检测ＡＥＶ抗体的单抗捕捉ＥＬＩＳＡ　方法。ＡＥＶ腹水单抗（腹水效价为１　∶１×１０６）最佳稀释度为１∶２００，ＡＥＶ抗原工作浓度为１６．０８　μｇ／ｍＬ，血清稀释度为１∶１　００，　兔抗鸡酶标抗体工作浓度为１∶５００。经阻断试验、交叉试验、重复试验，以及与进口试剂　盒　进行平行检测４０份血清，总符合率为９２．５％，表明该方法特异性强、重复性好、敏感性高，　是一种有应用前景的方法。     

一株疑似外来鸡致病性大肠杆菌的分离与鉴定

通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验和O血清型鉴定证实从某批国外进口发病雏鸡体内分离出一株大肠杆菌(F株),并利用动物试验成功复制了疾病.药敏试验和动物试验的结果表明,该大肠杆菌分离株耐药谱与国内分离菌株明显不同,对国内分离菌普遍耐药的喹诺酮类药物十分敏感;该茵对雏鸡具有明显的致病性,通过注射途径感染后的临床症状和病理变化都与自然病例类似;结合进鸡后34 h就发病并且仅发生于4个系别雏鸡中1个系别这一临床发病的特殊性,表明该大肠杆菌很可能是从国外携带而来.