鸡微粒体甘油三酯转运蛋白样基因生物学特性及表达调控

旨在探究鸡微粒体甘油三酯转运蛋白样基因（MTTPL）生物学特性及其表达调控机制,为进一步探讨其在鸡肝脂质代谢中的生物学功能奠定基础。本研究首先采用PCR和测序技术,克隆MTTPL cDNA序列;利用在线软件对MTTPL蛋白结构域、三维空间结构及系统进化树进行分析;构建pcDNA3.1-MTTPL-EGFP过表达载体,通过与内质网标签蛋白的表达载体DsRed-λ共转染鸡肝癌细胞系（LMH）细胞,对MTTPL进行亚细胞定位;分别采集不同周龄卢氏绿壳蛋鸡（1日龄、1周龄、10周龄、30周龄每个周龄各8只）组织样,采用荧光定量PCR分析MTTPL基因和鸡微粒体甘油三酯转运蛋白基因（MTTP）的时空表达谱;然后用0.5、1和2 mg·kg^-1体重浓度的17 β-雌二醇分别处理海兰褐鸡（每组20只）12和24 h后,分析雌激素对肝MTTPL和MTTP表达的影响;最后用1、50、和100 nmol·L^-1 17β-雌二醇及雌激素受体拮抗剂分别处理鸡胚肝原代细胞12 h （每组3个重复）,研究雌激素调控MTTPL基因表达的作用机制。结果表明,鸡MTTPL的CDS区全长为2 646 bp,可编码881个氨基酸,与人和鸡MTTP拥有共同的祖先;定位于细胞内质网;鸡MTTPL和MTTP具有与人MTTP相同的功能域,且三维结构相似度偏差较小,分别为0.090和0.064;MTTPL基因在鸡肝和肾组织中高表达,MTTP在鸡肝、肾和小肠中高表达;在肝中,MTTPL和ApoB的表达水平随周龄的增加均显著上升（P<0.05）,而MTTP的表达仅在10周前随周龄增加显著升高（P<0.05）,而在产蛋前（10周龄）和产蛋期（30周龄）无显著变化（P>0.05）;在17β-雌二醇处理鸡12和24 h时后,MTTPL及ApoB在肝中均显著上调表达（P<0.05）,而MTTP在高浓度处理时表达量显著下调（P<0.05）,在低浓度时无显著变化;与对照组相比,雌激素可显著上调鸡胚肝原代细胞中ApoB和MTTPL的表达（P<0.05）,而MTTP表达水平无显著变化;与雌激素处理组相比,雌激素及受体ERα拮抗剂MPP共处理组MTTPL基因表达水平显著降低（P<0.05）;与MPP和雌激素共处理组相比,ERα和ERβ受体拮抗剂ICI和TAM处理组MTTPL基因表达水平无显著变化。综上所述,鸡MTTPL位于内质网中,具有与人MTTP相似的功能结构域;MTTPL和MTTP均在肝中相对高表达,且MTTPL在产蛋期鸡肝的表达显著高于产蛋前期,而MTTP无显著变化。雌激素可通过与ERα受体结合调控鸡MTTPL的表达,而MTTP不受雌激素调控。表明MTTPL可能在鸡产蛋期肝脂质代谢中发挥重要作用。     

鸡FGF6基因生物学特性及其多态性与经济性状的关联分析

旨在探究鸡成纤维细胞生长因子6(fibroblast growth factor 6,FGF6)基因的生物学特性,挖掘FGF6基因单核苷酸多态性(SNP)位点并分析其与经济性状的相关性,为后续研究鸡FGF6基因对生长性状的影响提供参考。本研究对FGF6蛋白序列进行生物信息学分析;基于768只固始鸡-安卡鸡F₂资源群的GBS数据及相关经济性状表型数据对FGF6基因包含启动子2 kb区域SNP位点进行筛选,并进行连锁不平衡和关联分析,探究FGF6基因SNP和单倍型与鸡经济性状的相关性。生物信息学分析结果显示,鸡FGF6氨基酸序列与火鸡同源性为91.26%;系统进化分析表明,鸡FGF6与火鸡亲缘关系最近,其次是绿海龟,与斑马鱼遗传距离最远;保守性分析显示不同物种间FGF6保守性较高。鸡FGF6蛋白为亲水性蛋白、存在1个跨膜区,主要定位于细胞质;其二级、三级结构相符。鸡FGF6蛋白被22个磷酸化位点和1个N-糖基化位点修饰;与其受体家族FGFR1～4和EGF存在互作关系。鸡FGF6基因启动子区域筛选到6个SNPs位点,均位于1号内含子上;多态性分析显示6个SNPs位点存在...     

鸡成纤维细胞生长因子家族生物信息学特性及表达调控

【目的】探索鸡成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)家族的生物学特性及表达调控，为进一步研究FGF家族相关成员的生物学功能奠定基础。【方法】利用在线软件对鸡FGF家族19个成员的生物信息学特性进行系统分析；利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术对鸡FGF家族成员的组织时空表达特性及雌激素对FGF19和FGF23基因表达的影响进行分析；利用主成分分析对鸡FGF家族基因的遗传变异及其对不同鸡品种形成的贡献进行分析；采用混合线性模型对FGF19基因上的遗传变异与固始鸡不同阶段产蛋量进行关联分析。【结果】鸡FGF家族各成员均有1个相同的保守基序和FGF结构域。鸡FGF家族19个成员聚类在3个分支上。主成分分析显示，鸡FGF家族有助于蛋鸡和肉鸡品种分类。鸡FGF家族各成员在肝脏、肾脏、十二指肠、卵巢和腹脂器官中均有表达。FGF19基因在产蛋高峰期(30周龄)的卢氏鸡肝脏的表达水平显著高于产蛋前期(20周龄),而FGF23基因的表达水平无显著变化。雌激素可显著下调鸡肝脏FGF23基因的表达，显著上...