一种高效的农杆菌介导大豆子叶节转化体系的建立

以子叶节为外植体的农杆菌介导的大豆遗传转化体系,其转化效率受到受体基因型、无菌苗状态、丛生芽诱导及伸长和生根过程涉及的多种因素的影响。作者筛选了10个大豆栽培品种,选择诱导率最高的东农50作为转化的受体品种,建立子叶节为外植体的遗传转化化体系。还对萌发培养基中6-BA添加量和生根方式进行了研究。结果表明:萌发培养基中不添加6-BA伸长率可达2.51%～20.59%;伸长芽切下后浸入1mg/L的IBA中处理1min后于1/2MS培养基中生根,生根时间缩短,生根率提高至85.25%。经PCR检测,本转化体系的转化率最高可达7.10%。     

农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系中基因型的选择及抑菌条件的优化

大豆基因型对农杆菌介导大豆胚尖遗传转化体系的转化效率有很大影响,同时有效地抑制农杆菌是该体系的重要环节。研究选择3个东北地区主栽的大豆品种,以胚尖为外植体进行农杆菌介导的遗传转化,比较3个大豆品种的诱导率、伸长率和生根率,并在芽诱导、伸长及生根阶段采用不同的抗生素浓度配比,优化抑菌条件。实验结果表明3个品种中,黑农37为最佳受体品种;抗生素浓度对大豆胚尖遗传转化有很大影响。在芽诱导和伸长阶段添加头孢霉素300mg/L+羧苄青霉素150mg/L抑菌效果较好;而在生根过程中,不添加抗生素为最佳条件。