一种植物RNAi双元载体的构建

[目的]为利用RNAi技术研究植物基因组功能奠定基础。[方法]通过PCR技术克隆一系列RNAi双元载体所需要的元件：绿色荧光蛋白基因（gfp）、花椰菜花叶病毒启动子（CamV35S）、氨基糖苷3＇-腺苷酰基转移酶基因（aada）、胭脂碱合成酶基因终止信号（nos）,并进行组装,在双元载体质粒pCAMBIAl301的基础上构建目的载体。[结果]通过7种中间载体的构建,最后成功得到双元载体质粒pHBMT14。[结论]该载体的成功构建为以后的植物基因组功能研究提供了技术平台。     

惠州市产科质量现状分析

目的了解惠州市2011-2012年的产科质量。方法根据惠州市2011-2012年产科质量报表,对相关指标进行统计分析。结果 2012年惠州市高危产妇、新生儿窒息、剖宫产的发生率均比2011年高（P〈0.05或0.01）。2011年和2012年在城区医疗机构分娩产妇的剖宫产、高危产妇、产后出血、围产儿死亡、新生儿窒息等的发生率均高于乡镇医疗机构（P〈0.01）;产褥感染发生率,2011年城区高于乡镇（P〈0.05）,2012年两者相比差异无统计学意义（P〉0.05）。2012年妇幼保健院的剖宫产发生率低于2011年（P〈0.01）。2012年综合医院的剖宫产、高危产妇、产后出血、产褥感染及孕产妇死亡等的发生率均低于2011年（P〈0.01）。2011年及2012年的剖宫产和产后出血发生率,以及2011的产褥感染发生率和2012年的围产儿死亡率,均是妇幼保健院低于综合医院（P〈0.01）。结论惠州市的产科质量水平在不断提高;妇幼保健机构的产科技术力量优势明显;二级医疗机构是产科工作的主力助产技术服务机构。     

甘蓝型油菜乙酰辅酶A羧化酶3个亚基基因的克隆及其表达

[目的]为构建乙酰辅酶A羧化酶的叶绿体表达载体奠定基础。[方法]以从甘蓝型油菜叶片中提取的叶绿体基因组DNA为模板进行PCR扩增,克隆羧基转移酶β亚基基因。以从开花20~29 d后油菜幼胚中提取的总RNA为模板进行RT-PCR扩增,克隆生物素羧化酶和生物素羧基载体蛋白的cDNA序列。最后,乙酰辅酶A羧化酶的3个亚基基因被克隆到大肠杆菌表达载体中。[结果]SDS-PAGE分析结果表明乙酰辅酶A羧化酶的3个亚基基因分别被克隆到大肠杆菌表达载体中。乙酰辅酶A羧化酶的3个亚基基因在大肠杆菌中的表达产物分别为76.6、44.0和81.5 kD,其融合蛋白分别占总菌体蛋白的12%、10%和6%。[结论]不同品种的甘蓝型油菜生物素羧基载体蛋白cDNA序列存在较大差异。     

猪的快速育肥

本试验主要说明,大量应用青、粗饲料和搭配少量精饲料养猪,饲料中的营养成分能互相补充,可以获得经济、快速的育肥效果。试验共用十八头猪,分三组。第一组六头,生后六个月平均活重达七十二公斤(最高一头八十六公斤),采用“一条龙”饲养方式,共用精饲料一百五十七点九公斤(内碎米佔百分之二十一,豆饼百分之二十五,其余为糠麩),粉渣、糖糟一百五十一公斤(湿重),粉浆九十九点八公斤,青饲料七百四十五公斤(内牛皮菜占百分之二十七,迟白菜百分之十四,萝蔔菜百分之十一,水绣花、水浮莲百分之十八,洋苋菜百分之十,其余为野草等),每增重一公斤需精饲料二点二公斤,糟渣一点八公斤及青饲科十点五公斤;第二组六头,生后八个半月平均活重达七十五点七公斤(最高一头九十一点五公斤),采用“吊架子”饲养方式,共用精饲料一百五十点二公斤(内碎米占百分之四十,糠饼百分之三十四,其余为糠麸),粉渣四十五公斤(湿重),洗米、洗碗水二百五十公斤,青饲料一千七百七十点九公斤(白菜占百分之二十四,苋菜百分之四十二,水浮莲、水銹花百分之十四,甘薯藤百分之十三,南瓜百分之二,其余为蕹菜等),每增重一公斤需精饲料二公斤,粉渣零点六公斤及青饲料二十三点七公斤;第三组六头,生后九个月平均活重达七十五公斤(最高一头八十九公斤)采用     

环境微生物果胶酶活性研究

[目的]对从环境中筛选到的一种产果胶酶酶活较高的菌株进行酶学特征研究。[方法]通过功能平板从果园土壤中筛选到一种产果胶酶的菌株,通过DNS法在不同的温度和pH值条件下测定该酶酶活力。[结果]对菌株TP1粗酶进行的分析表明：其最适温度为60℃,最适pH值为7．50,酶活为38U,半衰期为1h,在80℃保温5min其酶活由最初酶活的79％下降到15％,温度下降到65℃后活性可恢复到最初酶活的65％以上。[结论]菌株TP1所产果胶酶的酶学特征适合推广,有进一步研究的价值。     

海藻酸钠裂解酶产生菌的筛选及酶活性研究

[目的]筛选海藻酸钠高效降解菌并研究其产酶活性。[方法]以海藻酸钠为唯一碳源,通过驯化培养、初筛、复筛得到一株优势菌,并对该菌的最适生长条件、最适产酶条件及酶的性质作了初步研究。[结果]优选出1株海藻酸钠高效降解菌8号菌株,为革兰氏阴性菌,形态为杆状。该菌在30℃培养72h产酶量最高。海藻酸钠裂解酶作用的最适底物质量分数为1．00％～2．00％,最适pH值为7．o,最适反应温度为4JD℃,温度继续升高,酶活力急剧下降。[结论]为海藻酸钠的有效降解提供了科学依据。     

油菜RNA干扰(RNAi)文库的构建

为了通过构建高通量RNAi(RNA干扰)双元载体来得到油菜RNAi文库,对PCR引物设计时,在目的片段5′端和3′端分别引入合适的酶切位点序列,在3种中间载体的基础上构建高通量RNAi双元载体pHBMT4。该载体Bsu36Ⅰ酶切位点间的片段可被油菜的任意一种功能片段取代。载体pHBMT4含有用以检测载体功效的gus报告基因,原多克隆位点处被一个插入目标序列表达框取代,该框含有的反向重复nos终止序列可自然形成发夹环结构引发转录后水平的基因沉默(PTGS)。通过抽提的油菜总DNA与载体pHBMT4相连转化获得了油菜RNAi文库,为以后研究油菜的基因组功能打下良好的基础。