东方百合高效离体再生体系的建立

采用东方百合鳞片叶切块为初始外植体,以从初始外植体上分化的丛生芽切段为次级外植体的两步外植体法,成功建立了东方百合的离体再生体系。研究了不同的2,4-D浓度及次级外植体的不同部位对愈伤组织诱导效果的影响,并确定了G418选择的临界浓度。结果表明:不同部位的次级外植体中,以短缩茎切片出愈率高、出愈快、愈伤组织致密;以MS附加2.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L BA的培养基最适于东方百合愈伤组织的诱导;G418选择的临界浓度为50 mg/L。一个中等大小已脱春化的鳞茎通过愈伤组织再分化植株一代就能扩繁出27 000株左右的新植株,从鳞片叶开始至开花需9个月。     

T-DNA插入麝香百合的研究

[目的]获得麝香百合转基因植株。[方法]采用2步外植体法和农杆菌介导的T-DNA插入技术转化麝香百合。[结果]菌液浓度OD600值为0.6~0.8时浸染效果好,同时附加250 mg/L的AS可以提高转化效率,50 mg/L G418为抗性筛选最适浓度。对经过抗性筛选的百合转化植株进行PCR分子检测,部分转基因植株呈阳性,初步证明T-DNA已插入到百合基因组中。[结论]该研究为利用T-DNA插入技术筛选优良的百合新品种奠定了基础。     

T-DNA插入麝香百合的研究

采用2步外植体法结合比较成熟的农杆菌介导T—DNA插入技术转化麝香百合,为快速选育百合新品种奠定基础。     

东方百合T-DNA插入突变株侧翼序列的分离及分析

采用反向PCR技术对东方百合(Oriental hybrid lily)T-DNA插入突变株的侧翼序列进行扩增并进行序列分析。结果表明:6个突变表型的植株都有T-DNA插入。扩增到的10个序列长度大都在500～900 bp左右。回收其中的8条亮带,克隆测序后,经NCBI BLASTx比对发现,除了B2序列因为太短没有显著的同源性以外,有1个是未知功能的蛋白。B1是Lys家族转录调节因子;CM1是C类细胞色素生成蛋白;CM2是糖转运跨膜蛋白;D1是特有的解旋酶家族;F1是rRNA小亚基甲基转移酶;G1是Arac家族转录调节因子。表明这些基因可能与这些突变表型有关。     

二步倍增东方百合“星球战士”及提高组培苗移栽成活率的研究

采用二步倍增法直接再生了东方百合“星球战士”。鳞片切块培养在MS＋4．4μmol／L BA＋0．5μmol／L NAA的培养基上50d后,再生出大量丛生芽。将丛生芽切块置于同样的培养基上进行诱导,40d后,从基部短缩茎切片上诱导出了大量不定芽,但是根切段上不再生芽。一个中等大小的东方百合“星球战士”鳞茎120d就可以再生出97200个独立完整的新植株。研究还发现：加椰糠的培养基质最适于组培苗的驯化培养因而获得最高的移栽成活率。组培苗移栽后生长正常,2a后正常开花。     

室内鳞片扦插法高效再生麝香百合

采用鳞片扦插法有效地繁殖了麝香百合鳞茎.研究不同部位的鳞片、不同的培养基质、不同浓度的NAA或IBA对繁殖效率的影响.结果表明:当外部鳞片迅速蘸入NAA(100mg/L)和IBA(1.5mg/L)后插入由等体积的砂,椰糠和壤士配比的培养基质中,所再生小鳞茎的效果最好.研究中还发现,小鳞茎的形成与生长受光照的影响很大.该技术具有繁殖效率高、成本低的优点,是一条快速繁殖麝香百合种球的良好的技术途径.