PCV2衣壳蛋白羧基端基因在T4噬菌体表面的展示及ELISA方法的建立

用PCR扩增猪圆环病毒Ⅱ型广东分离株的衣壳蛋白羧基端基因,将PCR产物连接到pR质粒,转化DH5α细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定并测序后,转化E2菌,将重组E2菌与缺陷型噬菌体T4-Z1同源重组后,得到重组噬菌体,经SDS-PAGE和Western blotting分析,表明衣壳蛋白片段在噬菌体表面正确展示,表达的融...     

基于改进ConvNeXt模型的黄羽鸡表皮层黑色素智能分级方法

为解决活体黄羽鸡表皮层黑色素分级方法成本高、效率低下、分级环境易受环境光干扰等问题,该研究探索一种基于ConvNeXt模型的黄羽鸡表皮层黑色素智能分级方法 ConvNeXt-WPCA,用于实现活体黄羽鸡表皮层黑色素智能分级。ConvNeXt-WPCA模型通过以下3点改进提高模型对黄羽鸡黑色素的识别效果：1）针对黄羽鸡黑色素图像RGB三通道内黑色素信息分布不均衡问题,改变输入图片通道权重来增强模型对黑色素特征的提取能力;2）使用部分卷积代替深度可分离卷积,减少模型计算量和内存访问次数提高对计算资源的利用率;3）引入坐标注意力机制,引导模型关注黄羽鸡胸腹部及肛门附近皮肤提升模型精度。同时,该研究还设计一种双光源图像获取装置,分别在自然光和偏振光条件下拍摄黄羽鸡样本,以减小分级结果受环境光干扰的影响,并探索偏振光在黑色素分级任务中的应用潜力。结果表明ConvNeXt-WPCA模型相较标准ConvNeXt模型,针对自然光下黄羽鸡黑色素图像数据集分级准确率提升9.68个百分点,最终达到89.03%的识别准确率,针对偏振光下黄羽鸡黑色素图像数据集分级准确率提升15.26个百分点,最终达到98.87...     

PCV2·ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化

[目的]为了研究PCV2-ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化。[方法]用PCR方法扩增PCV2 ORF2基因3′端片段,PCR产物经酶切后与经同样处理过的pET32a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21感受态细胞;重组菌液用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。[结果]ORF2基因在大肠杆菌中正确表达,表达的融合蛋白的分子量约为33 ku;在37℃、1 mmol/L浓度下,诱导时间为6 h时表达量最大,占细菌总蛋白的23.62%。表达产物主要以包涵体的形式存在,将包涵体溶解后过Ni-NTA柱纯化可得到较为纯净的目的蛋白。[结论]该研究为猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)和猪皮炎和肾病综合征(PDNS)等疾病的防治奠定了基础。     

H1亚型猪流感病毒广东株HA基因的原核表达

为了研制猪流感检测试剂和流感亚型特异性单抗筛选所需的重组抗原,本研究克隆和原核表达了H1N1亚型猪流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因.首先采用RT-PCR方法扩增了H1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的HA基因.测序结果表明,扩增的SIV HA基因cDNA长度为 1 701 个核苷酸,共编码566个氨基酸.BLAST分析表明,H1N1亚型SIV广东株HA基因核苷酸序列与GenBank中已发表的中国香港特别行政区、中国大陆、美国分离的经典H1亚型毒株相近,核苷酸序列同源性在89%以上.然后将HA基因的cDNA片段亚克隆至pET32a( )表达载体中,构建重组质粒pET32a-H1,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达.SDS-PAGE和凝胶扫描分析表明,HA基因在大肠杆菌中获得了高效表达,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25.2%.经免疫印迹证实重组蛋白可以被SIV特异性抗体所识别.     

公猪精液PRRSV变异株检测及NSP2、ORF5基因序列分析

用荧光RT-PCR方法从某猪场精液中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株(NSP2 1 594～1 680 bp缺失)核酸阳性.提取1份阳性样品病毒核酸测定和分析其NSP2和OBF5全基因序列,结果表明NSP2基因由950个氨基酸组成,与CH-1a、VR-2332等经典PRRSV相比481位缺失1个氨基酸、532～560位连续缺失29个氨基酸,与JXA1、HUN4等毒株具有相同的缺失特性;ORF5基因第13、151位为具有强毒特性的精氨酸(R),存在4个潜在的糖基化位点,分别位于30～32、35～37、44～46和51～53位氨基酸.遗传进化分析表明,测定序列与JX-A1、HUN4等毒株关系最近,与CH-1a、NVSL等同属一个大分支,而与BJ-4、P129、RespPRRS MLV、VR-2332等处于不同分支.研究证实公猪精液可携带PRRSV变异株,因此猪场(群)在人工授精和引进精液时必须强化检疫和生物安全措施.     

霍乱弧菌封闭带毒素功能片段△G的原核表达及其免疫增强活性

用PCR扩增了MBP—ZOT质粒上的ZOT基因，该基因编码264～399位氨基酸残基C末端的15ku △G片段，并与经改造后的质粒P^BCX、连接。将重组后的质粒PMLAG在大肠杆菌BL21中表达，将表达的目的蛋白纯化，再将p^BCX-△G片段与传染性腔上囊炎病毒VP2包涵体蛋白通过滴鼻免疫途径对14日龄SPF鸡进行联合免疫试验，分别于免疫后第10、20d采集血清样品，进行ELISA试验，检测免疫后IBD抗体效价。动物免疫试验发现：融合蛋白P^BCX △G起到了明显免疫增强效果，与VP2重组蛋白联合免疫2次后，血清IBD的VP2 IgG抗体效价是单独用VP2免疫组的3倍，明显高于空白免疫组。     

主动免疫血管活性肠肽（VIP）对家鸽繁殖性能影响的初探

将３０对青年鸽随机分为三组，第一组用血管活性肠肽（ＶＩＰ）类似物与牛血清蛋白（ＢＳＡ）的偶联物进行主动免疫ＶＩＰ，第二组注射与第一组等量的生理盐水，第三组不做任何处理。在试验的第一阶段，除第三组外，第一、二组鸽在产蛋后立即将书目是拿出，试验结果显示：第一组与第二组鸽月产蛋量和周抱窝数差异不显著。但第一、二组鸽产蛋量与第三组（自然饲养组）差异极显著。在试验的第二阶段（Ｂ处理过程）均不把蛋拿出，则三组     

不同人工鸽乳０—１０日龄乳鸽的饲喂效果

用１、２、３、４、５五种不同营养配方的人工鸽乳饲喂刚出壳且未经亲鸽喂过的雏鸽。试验分为５组，每组设３个重复。饲喂至１０天，又选出１、５配方进行重复试验。对４、７、１０天乳鸽的体重进行显著性检验，同时用与试验组同鸽场自然哺育的乳鸽的同日龄体重作对照。结果显示：在４、７日龄时，各组间的增重差异不显著（Ｐ＞０．０５）；而１０日龄时，１组与２、３、４组差异极显著（Ｐ＜０．０１）；２组与４组差异显著（Ｐ＜０．０５）；１组与５组差异不显著（Ｐ＞０．０５）。从１０日龄乳鸽的增重效果看出；５种人工鸽乳中，１组的饲养效果最佳，４、５组次之，２组最差。而试验组全群（１７０只）乳鸽的成活率平均为９３．５％，１组成活率为１００％。试验结果表明：乳鸽完全可以脱离亲鸽而进行人工喂养，乳鸽出壳至１０日龄生长所需的最佳能量和蛋白需要分别为１５．３８ＫＪ／kg和５３．３％（以干样计）。     

抵抗素样Relmβ分子研究进展

Relmβ亦称发现于炎症带2(found in inflammatory zone2,FIZZ2),是一种富含半胱氨酸的分泌蛋白。目前的研究表明,Relmβ在许多方面发挥着非常重要的作用,包括胰岛素抵抗,抵制肠腔寄生线虫的感染,预测胃肠道肿瘤的发生,促进小鼠结肠炎和回肠炎模型中的炎症反应,诱导肺部纤维化、缺氧肺血管的重建,促进气道重塑等。通过对Relmβ分子的结构、表达分布、生物学功能的研究进展进行归纳,为Relmβ分子在生物学和医学方面更深入的研究提供参考。     

新城疫病毒广东基因Ⅶ型分离株的分离鉴定及F基因克隆与序列分析

2011年从广东一疑似新城疫病毒感染的养禽场通过SPF鸡胚接种试验、HA及HI试验和动物回归试验,生物学毒力指标(MDT,ICPI)测定,分离到一株新城疫毒株,命名为GD-X1-2011,并对该毒株进行了F基因的序列测定分析.GD-X1-2011株的MDT为45 h＜60 h,ICPI为1.88＞ 1.6,分离毒株具有血凝性且能被NDV La Sota标准阳性血清抑制,动物回归试验鸡出现典型的新城疫症状.毒株GD-X1-2011F基因的裂解位点序列为112R-R-Q-K-R-F117,属于强毒裂解序列,其F基因与基因Ⅶ型毒株SD-WF07-2011同源性为97.5％,与其他不同基因型毒株的同源性在83.6％～90.1％之间.进化树分析GD-X1-2011株属于基因Ⅶ型毒株.